磷酸化精氨酸相关多肽和蛋白修饰构建与功能研究

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蛋白质精氨酸磷酸化(pArg)是一种新型的蛋白质翻译后修饰。在革兰氏阳性菌中,pArg蛋白涉及了几乎所有的生理过程,如基因转录调控、蛋白质质量控制等;在人类急性T细胞白血病Jurkat细胞中,pArg蛋白主要参与核酸相关的生理过程,如RNA剪接、核酸结合等。因此,pArg在生命体中具有非常重要的生理意义。近几年,pArg的研究虽然取得了一定的进展,然而其自身的化学特性仍然是研究进展缓慢的主要原因。由于pArg中P-N键的酸不稳定性、热敏感性,使得pArg样品不易获得,这也导致了 pArg抗体难以制备,阻碍了 pArg蛋白的功能研究。因此,本论文制备含稳定pArg类似物样品并进行pArg相关多肽与蛋白的功能研究,主要研究成果如下:(1)利用Cys巯基和脱氢丙氨酸Dha与pArg稳定类似物(pAIE、pBIE、pCIE、pTIE)进行二硫键交换反应、Michael加成反应和自由基加成反应,首次实现了在多肽与CtsR蛋白上定点引入四类pArg类似物,这为pArg样品的制备、序列依赖性抗体甚至单克隆抗体的开发提供基础、为研究pArg蛋白功能提供可能;此外,γ-硫代赖氨酸的定点引入,实现了双向引入。(2)N端乙酰化多肽Ac-KRGGGGYIKIIKV(PR2)可以结合clpC中七碱基序列重复单元的7re-dsDNA,其结合常数与CtsR和DNA的结合在107 M-1数量级,揭示其可能对CtsR与DNA结合有一定的抑制作用;另外,pArg调控PR2与7re-dsDNA的结合,说明pArg对调控基因转录可能具有重要作用。(3)蛋白质精氨酸酯酶YwlE负调控pArg水平,其酯酶活性与细胞信号传导密切相关。Bacillus subtilis内存在诸多金属离子,这些离子对YwlE活性有不同影响,这为研究Bacillus subtilis内金属离子与YwlE活性关系奠定基础;另外,含氧阴离子对YwlE活性影响的研究能够为其抑制剂的开发提供思路。因此,本论文的研究成果为探索pArg在细胞信号通路中的重要作用建立了可靠基础,拓展人们对pArg的认识。
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