【摘 要】
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目的:探究离体培养中,酸敏感离子通道1a在胆红素所诱导的耳蜗毛细胞以及螺旋神经节神经元毒性中的作用。方法:研究采用新生3天Sprague-Dawley大鼠幼仔耳蜗器官培养作为验证体系。动物断头后解剖出基底膜放置在无血清培养液覆盖的鼠尾凝胶表面,在37℃,5%CO2培养箱中培养12小时后进行分组实验处理。基底膜随机分为对照组、胆红素组、酸敏感离子通道1a阻断剂组和酸敏感离子通道1a阻断剂+胆红素共同
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目的:探究离体培养中,酸敏感离子通道1a在胆红素所诱导的耳蜗毛细胞以及螺旋神经节神经元毒性中的作用。方法:研究采用新生3天Sprague-Dawley大鼠幼仔耳蜗器官培养作为验证体系。动物断头后解剖出基底膜放置在无血清培养液覆盖的鼠尾凝胶表面,在37℃,5%CO2培养箱中培养12小时后进行分组实验处理。基底膜随机分为对照组、胆红素组、酸敏感离子通道1a阻断剂组和酸敏感离子通道1a阻断剂+胆红素共同处理组,培养24小时后取样本进行结果分析验证。通过免疫印迹检测和免疫荧光染色技术验证酸敏感离子通道1a在耳蜗基底膜组织中的表达,利用耳蜗基底膜铺片和免疫荧光染色技术,观察耳蜗毛细胞,螺旋神经节神经元的形态学改变、数目变化以及凋亡信号的出现。结果:在pH=7.4的培养环境下,50umoL/L胆红素处理后耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元形态基本正常,未见细胞数量缺失,pH=6.8的培养环境下,50umoL/L胆红素处理后耳蜗毛细胞形态出现异常,未见其数量缺失,但螺旋神经节神经元开始出现不同程度的损伤,部分螺旋神经节神经元出现胞体缩小,伴有细胞核固缩或碎裂;100umoL/L胆红素处理后螺旋神经节神经元胞体体积明显缩小,伴有细胞核固缩或碎裂,细胞数目明显减少,毛细胞开始出现不同程度的纤毛异常及数量缺失,且pH=6.8较pH=7.4的培养环境,胆红素毒性作用更强;酸敏感离子通道1a阻断剂+100umoL/L胆红素共同处理后,螺旋神经节神经元和毛细胞形态异常及数量缺失均较单纯胆红素组减轻,并且Caspase-3阳性螺旋神经节神经元数量减少。结论:在耳蜗器官培养中,胆红素以剂量依赖性的方式损伤耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元,且酸性培养环境下胆红素对基底膜的毒性作用更强;阻断酸敏感离子通道1a可以减弱胆红素诱导的毛细胞和螺旋神经节神经元损伤。
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