目的:乳腺癌是女性中高发性的癌症,致死率极高。目前治疗乳腺癌的方法包括化疗、放疗、手术切除等。顺铂是临床上常用的化疗药物之一,通过与DNA结合并产生交联抑制肿瘤细胞的生长从而诱导癌细胞凋亡。但是顺铂会产生一系列的细胞毒性,伤害身体正常的细胞和免疫系统,因此顺铂的使用剂量有严格的控制,此外肿瘤细胞会产生耐药性,降低顺铂的疗效。因此寻找一个有效的治疗策略去增强癌细胞对化疗药物的敏感性,从而减少化疗药物的使用剂量,具有重要的临床意义。黄连素是从一些重要的药用植物根茎中提取出的一种异喹啉生物碱,已广泛应用于临床。有报道称黄连素具有消炎、抗癌的作用,并且对正常人类细胞的毒性很小。近些年有一些研究表明它对于多种类型的癌细胞都有抑制作用,但是其抗癌机制并不明确。本研究使用BT549、MDA-MB-231、MCF-7三种乳腺癌细胞检测黄连素对乳腺癌细胞的抑制作用机制。证明黄连素具有抑制乳腺癌细胞增殖的作用,同时增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性,为临床癌症的治疗提供新的策略。方法:1.采用MTT法检测不同浓度黄连素及顺铂对乳腺癌细胞增殖能力的影响。2.划痕实验检测黄连素及顺铂对三种乳腺癌细胞迁移能力的影响。3.细胞克隆形成实验检测黄连素及顺铂对三种乳腺癌细胞克隆形成能力的影响。4.流式细胞Annexin V/PI双染法检测黄连素及顺铂作用于MDA-MB-231细胞后细胞凋亡率的变化;Western Blot法检测黄连素作用于细胞后细胞内PARP1、Caspase 3/9、Bcl2、BAX、AKT、p-AKT蛋白表达的变化;免疫荧光法检测细胞内细胞色素C的释放情况。5.免疫荧光法检测黄连素联合顺铂作用于乳腺癌细胞后,细胞内γH2AX的表达情况,Western Blot法检测细胞内RAD51、PCNA、Lig4蛋白表达的变化。6.建造MDA-MB-231裸鼠肿瘤模型,研究黄连素及顺铂对裸鼠体内肿瘤生长的抑制作用;免疫组织化学法检测肿瘤组织Ki67和Caspase 9蛋白的表达。结果:1.MTT实验结果表明黄连素及顺铂可抑制乳腺癌细胞增殖,其抑制作用具有时间和剂量依赖关系。2.划痕实验表明黄连素及顺铂可抑制乳腺癌细胞的迁移。3.细胞克隆形成实验表明黄连素及顺铂可抑制乳腺癌细胞细胞克隆形成的能力。4.Annexin V/PI双染结果显示黄连素及顺铂促进乳腺癌细胞凋亡;Western Blot结果表明黄连素及顺铂能够增加乳腺癌细胞内凋亡相关蛋白PARP1、Caspase 3/9、BAX的表达,降低抗凋亡蛋白Bcl2的表达,增加增殖相关蛋白AKT的表达,但是降低磷酸化蛋白AKT的表达,表明黄连素及顺铂可促进乳腺癌细胞凋亡;免疫荧光法结果表明黄连素及顺铂促进乳腺癌细胞线粒体内的细胞色素C的释放,证明了黄连素协同顺铂可激活乳腺癌细胞Caspase的凋亡途径。5.免疫荧光实验结果表明黄连素增强细胞内γH2AX的表达,显示黄连素能够引起DNA损伤,联合顺铂后进一步导致DNA损伤;Western Blot实验结果显示黄连素降低细胞内RAD51、PCNA蛋白的表达,增强Lig4蛋白的表达,进一步证明黄连素能够引起DNA损伤。6.裸鼠体内试验结果显示黄连素及顺铂抑制了体内肿瘤的生长;免疫组化实验显示黄连素能够降低Ki67的表达,增加Caspase 9的表达,证明黄连素及顺铂能够抑制肿瘤的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡。结论:实验研究证明黄连素及顺铂在体外能够引起MCF-7、BT549、MDA-MB-231乳腺癌细胞DNA损伤,抑制DNA损伤修复蛋白的表达,干扰同源重组修复效率从而导致细胞死亡,并且抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,激活Caspase依赖的凋亡通路引起细胞凋亡;体内实验说明了黄连素及顺铂能够抑制裸鼠体内肿瘤细胞的生长并且诱导肿瘤细胞凋亡。