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肝片吸虫是一种人兽共患寄生虫，该寄生虫能够感染包括人在内的许多哺乳动物。受片形吸虫感染的动物临床症状主要是急性或慢性肝炎和胆管炎。建立快速、方便且较为特异、灵敏的肝片吸虫检测方法，对于及时诊断片形吸虫病、进行流行病学调查以及建立片形吸虫病防控预警系统有重要作用。 本研究建立了基于第二内转录间隔区（its-2）基因的肝片吸虫普通PCR及SYBR Green荧光定量PCR检测方法。通过对反应体系和反应条件的优化，普通PCR敏感性为212 fg/μl。SYBR Green荧光定量PCR敏感性达到0.167 fg/μl，比普通PCR高3个数量级，组内重复性试验的变异系数在0.13％-1.06％之间，组间重复性试验的变异系数在0.15％-1.46％之间，均小于2％，说明该方法具有良好的重复性。本研究建立的普通PCR和SYBR Green荧光定量PCR均能以肝片吸虫基因组为模板扩增出目的条带或扩增曲线，与微小隐孢子虫、羊蛔虫、小型艾美耳球虫、大肠杆菌、捻转血矛线虫基因组无交叉反应，显示出较好的特异性。对浙江嘉兴地区羊场采集的共250份粪样进行流行病学调查，粪便镜检法共检出阳性样本2份，阳性率为0.8％。普通PCR方法检出阳性样本7份，阳性率为2.8％。荧光定量PCR检测出阳性样本8份，阳性检出率为3.2％，经测序，检出的阳性样本与目的基因相似性在99％以上，两种PCR方法灵敏性和特异性均较高。 本研究还利用大肠杆菌原核表达系统表达的羊肝片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)为诊断抗原，建立了羊肝片吸虫感染斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)检测方法。研究显示，重组蛋白大小约30 kDa，各组分的最适反应条件为:抗原最适包被量为0.28μg/片，血清最佳工作浓度和工作时间分别为1∶400和30 min，酶标二抗最佳工作浓度和工作时间分别为1∶800和45 min，血清和酶标二抗最佳反应温度均为37℃，最适封闭液和封闭条件分别为2％BSA-TBS和37℃2 h，最佳显色时间30 min。特异性试验显示该方法与捻转血矛线虫、细粒棘球蚴、土耳其斯坦东毕吸虫阳性血清无交叉反应。该方法灵敏度高、重复性好。但该Dot-ELISA与大片吸虫是否存在交叉反应需要进一步的研究。运用该方法对浙江海宁和桐乡共200份羊血清样本进行检测，阳性率为1.5％，提示浙江海宁和桐乡对羊肝片吸虫感染控制较好。 综上所述，本研究建立的普通PCR具有较好的特异性，并首次建立了基于its-2基因的肝片吸虫SYBR Green荧光定量PCR检测方法，本研究还应用硫氧还蛋白过氧化物酶重组蛋白，通过聚偏氟乙烯微孔(PVDF)膜固相载体，建立了肝片吸虫Dot-ELISA检测方法，为兽医基层和实验室羊肝片吸虫感染的诊断提供了新方法。