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研究背景:
胸苷磷酸化酶(TP)是DNA合成过程中的关键酶,已证实与血小板衍化内皮生长因子(PD-ECGF)为同种物质,还能在组织内转化5’-脱氧氟尿苷(5’-DF(JR)为5-氟尿嘧啶(5-FU)发挥选择性细胞抑制作用。因此TP对恶性肿瘤的生长、转移、预后及临床治疗均有重要意义。近年的研究普遍认为在结直肠癌组织中TP主要由肿瘤间质细胞特别是肿瘤相关巨噬细胞(TAM)表达,组织中TP活性与患者预后相关。肝脏是结直肠癌晚期转移的主要器官,目前国内外关于结直肠癌肝转移组织中TP表达的研究尚未见报道。本实验通过对28例结直肠癌肝转移标本进行免疫组织化学染色,研究人结直肠癌肝转移组织中TP的表达及其与TAM之间的相互关系,以及TP阳性细胞数与患者预后之间的关系。
材料与方法:
1、临床标本:人结直肠癌肝转移标本28例取自广州医学院第二附属医院普外科1996年9月至2005年12月的手术标本。其中男性20例,女性8例。年龄最大78岁,最小21岁,平均56岁。其中低分化癌2例,中分化癌24例,高分化癌2例。
2、抗体和试剂盒:一抗采用小鼠抗TP单克隆抗体654-1(1∶800)、小鼠抗TP单克隆抗体抗1C6-203(1∶400),此2抗体由日本Roche Research Center提供。巨噬细胞标记物CD68的单克隆抗体PG-Ml(1∶lOO),购自DAKO公司。以小鼠非特异性抗体IgGI(1∶100)为阴性对照。染色过程中所需的SP-2001试剂盒、二抗试剂盒、DAB试剂盒均购自美国Vector公司。
3、染色结果的判定及细胞计数方法:654-1和1C6-203抗体的阳性细胞表现为细胞核或细胞质棕黄色染色,偶尔也可见到单独细胞核黄染。CD68阳性细胞染色位于细胞膜呈铁锈色。先在低倍视野下选择5处阳性细胞最密集区,然后分别在400倍视野下(0.0625mm<2>)下进行计数,然后分别计算出每种阳性细胞的x±s。
4、统计学分析:应用SPSS13.0统计分析软件包对数据进行Spearman相关及线性回归分析,当P<0.05时,认为差异有统计学意义。
结论:
人结直肠癌肝转移组织中表达TP阳性的细胞主要是TAM。组织中TP阳性及CD68阳性巨噬细胞的数目与患者预后生存的时间无相关。