论文部分内容阅读
目的探索新型生物活性材料——透明质酸(HA)和透明质酸—含银生物活性玻璃复合物(HA/Ag-BG)对人牙髓干细胞的增殖活性、促成牙本质细胞向分化的能力以及对变形链球菌和干酪乳杆菌的抗菌活性,以期获得能够促进牙体组织修复再生的理想材料。方法课题组的前期实验已筛选出1/20稀释浓度的HA和HA/Ag-BG浸提液作为促进人牙髓干细胞细胞活性的最适浓度,本实验将针对HA/Ag-BG对人牙髓干细胞增殖、向成牙本质细胞分化以及抗菌活性的影响做进一步研究。实验分为三部分:1 HA和HA/Ag-BG对人牙髓干细胞增殖的影响。将HA和Ag-BG按质量比1:1进行混合,配制HA/Ag-BG复合物。制备HA和HA/Ag-BG浸提液母液,使用含10%胎牛血清和1%青链霉素的Alpha-MEM完全培养基对浸提液母液进行稀释,得到1/20稀释浓度的HA和HA/Ag-BG浸提液备用。培养人牙髓干细胞并接种于96孔板,将接种细胞随机分为三组,细胞贴壁后弃原培养基,在三组中分别加入完全培养基、HA浸提液以及HA/Ag-BG浸提液继续培养,分别在第1、3、5、7天,应用CCK-8试剂盒检测人牙髓干细胞的增殖活性。2 HA和HA/Ag-BG对人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化的影响。制备HA组、HA/Ag-BG组和对照组促分化培养基。培养人牙髓干细胞并接种于六孔板,接种细胞被随机分为三组,三组细胞与牙磨片共同孵育,在各组促分化培养基中培养21天后,提取各组细胞总RNA,采用Real-time PCR检测ALP、DMP1、DSPP、RUNX2基因m RNA的相对表达水平。3 HA和HA/Ag-BG抑制变形链球菌和干酪乳杆菌的能力。将等体积的PBS、HA浸提液和HA/Ag-BG浸提液分别与变形链球菌和干酪乳杆菌混合,37℃孵育24h,连续稀释至10﹣1、10﹣2、10﹣3、10﹣4、10﹣5梯度浓度后接种于琼脂平板,继续孵育48h后进行菌落计数。采用SPSS17.0的统计学软件对实验结果进行统计学分析,实验数据使用均数±标准差((?)±s)的形式表示。组间比较采用单因素方差分析,检验水准α=0.05。各项实验重复三次。结果1 CCK-8法检测结果显示:人牙髓干细胞在常规培养基、HA浸提液和HA/Ag-BG浸提液培养的第1天和第3天时,三组细胞间的增殖活性未见明显差异(P>0.05);当继续培养至第5天和第7天时,HA组和HA/Ag-BG组分别与对照组相比,均未见明显差异(P>0.05),而HA/Ag-BG组表现出比HA组具备更高的增殖活性(P<0.05)。2 Real-time PCR检测结果显示:经HA组促分化培养基培养的人牙髓干细胞,其ALP、DMP1、DSPP、RUNX2基因m RNA的表达水平均高于HA/Ag-BG组(P<0.05);同时HA组DSPP、RUNX2基因m RNA的表达水平也高于对照组(P<0.05);而HA/Ag-BG组DMP1基因m RNA的表达水平却低于对照组的表达水平(P<0.05),ALP、DSPP以及RUNX2的表达水平与对照组相比,未见明显差异。3抗菌实验结果显示:与对照组相比,在变形链球菌菌悬液以及干酪乳杆菌菌悬液中分别加入HA浸提液以及HA/Ag-BG浸提液后,共培养后计数菌落形成单位,数值显著降低(P<0.05)。结论1 HA/Ag-BG比HA具有更高的促进人牙髓干细胞增殖的能力。2 HA比HA/Ag-BG具有更高的促进人牙髓干细胞分化为成牙本质细胞的能力。3 HA和HA/Ag-BG对变形链球菌以及干酪乳杆菌的生长均可起到有效的抑制作用。