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目的：原发性肝癌（简称肝癌）是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一，起病隐匿、恶性程度高、进展迅速，多数患者在症状出现时已处于中晚期而错失手术机会，手术治疗仍是治疗肝癌的首选方法，但多数患者在术后2年内出现肿瘤复发，术后肿瘤转移和复发已成为影响肝癌患者能否长期生存的主要问题，而肿瘤血管新生是肿瘤生长和转移的主要原因。血管内皮生长因子家族(vascular endothelial growth facter family members,VEGFs)在血管新生过程中起关键作用。作为VEGF家族成员之一的VEGF-B在肝癌进展过程中呈现高表达状态，并影响肝癌患者的预后。因此抑制VEGF-B基因表达有望成为治疗肝癌的一种新手段。RNA干扰（RNAinterference，RNAi）是通过一定途径将与内源性mRNA编码区同源的双链RNA（double stranded RNA, dsRNA）导入细胞内，致该mRNA发生降解而产生基因表达沉默的效果。其中小干扰RNA（small interferenceRNA，siRNA）是RNAi的主要效应分子，是由20多个核苷酸组成的小片段dsRNA分子。以质粒或者病毒为载体将靶向基因siRNA导入细胞，并对特定基因产生沉默。本研究利用RNAi技术，设计针对VEGF-B基因的siRNA，转染肝癌细胞株HepG2细胞，通过建立裸鼠皮下种植瘤模型，观察实验组与对照组种植瘤的生长情况，并应用免疫组织化学染色法检测各组VEGF-B蛋白表达情况。方法：利用RNAi技术，将体外合成的VEGF-B基因靶向siRNA转染入人肝癌细胞株HepG2细胞，分别建立阴性组（对照组）Eg0以及三个阳性组（实验组）Eg1、Eg2、Eg3。用Blasticidin稳定筛选后，进行培养扩增，最后共得到四组HepG2细胞：三组VEGF-B基因靶向siRNA阳性质粒转染组(Eg1、Eg2、Eg3)、阴性对照空载质粒转染组(Eg0)。然后分别接种于4组裸鼠皮下(每组6只，随机分配)，建立人肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤模型，即Ec0组、Ec1组、Ec2组、Ec3组。定期观察裸鼠皮下种植瘤的生长情况，30天后处死裸鼠，对比测量4组裸鼠皮下种植瘤的体积、重量，并用免疫组织化学染色法检测分析VEGF-B蛋白的表达。采用Image-Pro Plus6.0图像分析系统进行相对定量分析，计算每个视野的单位面积内阳性染色积分光密度值(IOD)，取其均值进行统计分析。结果：1以含荧光标记的质粒为载体，成功将VEGF-B基因靶向siRNA转染入人肝癌细胞HepG2细胞，48小时后转染效率均达60~70%。224只裸鼠皮下均成瘤，3个实验组裸鼠皮下种植瘤平均生长速度较对照组缓慢，30天后种植瘤体积对照组为：(1.698±0.137)cm3，实验组分别为(1.107±0.355)cm3、(1.229±0.099)cm3、(1.162±0.188)cm3，瘤体重量对照组为：(1.068±0.086)g，实验组分别为：（0.696±0.224)g、(0.772±0.062)g、(0.730±0.118)g。3个实验组种植瘤体积及重量均显著小于对照组(P<0.05)，种植瘤未见远处转移。3免疫组织化学染色结果显示，实验组（Ec1、Ec2、Ec3）及对照组（Ec0）结果分别为：(0.072±0.016)，(0.078±0.004)，(0.075±0.008)，(0.094±0.003)。两组间有统计学差异（P<0.05）；3个实验组种植瘤VEGF-B蛋白表达水平显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论：体外构建VEGF-B基因靶向siRNA可明显抑制裸鼠皮下种植瘤的生长及瘤组织VEGF-B蛋白的表达。