【摘 要】
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根串珠霉(Berkeleyomyces basicola)是一种常见的丝状真菌,半活体寄生,引起植物的土传根黑腐病,在全球各地都有分布。根串珠霉的寄主范围广泛,可侵染棉花、烟草、胡萝卜等33个科的130余种植物,包括多种重要经济作物、农作物和观赏植物,严重威胁着以上植物在各个产区的产量和质量,给世界各地区经济造成了严重损失。目前暂无根串珠霉LAMP快速检测的报道,也鲜有关于不同寄主来源该病菌致病力
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根串珠霉(Berkeleyomyces basicola)是一种常见的丝状真菌,半活体寄生,引起植物的土传根黑腐病,在全球各地都有分布。根串珠霉的寄主范围广泛,可侵染棉花、烟草、胡萝卜等33个科的130余种植物,包括多种重要经济作物、农作物和观赏植物,严重威胁着以上植物在各个产区的产量和质量,给世界各地区经济造成了严重损失。目前暂无根串珠霉LAMP快速检测的报道,也鲜有关于不同寄主来源该病菌致病力差异及此类菌株对碳氮源的利用差异情况的报道。为明确以上问题,本研究就不同寄主来源根串珠霉菌的分子检测、致病力差异、碳氮源的利用等方面进行了较为系统的研究和分析,以对该菌引起的根黑腐病进行早期诊断及防治提供依据。研究结果如下:1.基于28s rDNA-ITS序列为靶基因设计的四条LAMP特异性引物,可成功扩增不同寄主来源根串珠霉菌株,用单因素水平优化法建立并优化了根串珠霉的LAMP检测体系,该25μL反应体系中含有:MgSO4(100 mM)1μL,10×Thermopol Buffer 2.5μL,d NTP混合液(10 mM)1.5μL,甜菜碱(5 M)3μL,内引物(FIP、BIP)40μM各1μL,外引物(F3、B3)5μM各1μL,BstDNA聚合酶(8 U/μl)1μL,DNA模板1μL,无菌dd H2O 11.75μL。扩增程序和后续处理:62℃水浴60 min,80℃水浴灭活20 min,其中2μL反应产物用于电泳检测,其余用1μL的SYBR GreenⅠ染色后进行可视化颜色观察。用该体系对病样的检测证明,该组引物特异性强,优化体系检测灵敏度高,最低检出浓度为162 fg/μL,且操作简单、检测结果肉眼可见。2.用改良的伤根接种法测定了5个不同寄主来源菌株对4种植物的致病力,结果表明:不同寄主来源根串珠霉对同一接种对象的致病力有差异,同一寄主来源菌株对不同寄主植物致病力不同,且每一菌株对自身来源寄主致病力要强于对其他植物的。其中来自烟草的菌株HLL5-2除了对烟草致病力高外,对其他供试植物致病力都偏低,来自胡萝卜的菌株10HU-7B对所有供试植株的致病力都比较中等,而来自棉花的菌株SYSB-03对其他的供试植物的致病力都比较高。3.取上述3个致病力差异明显的菌株,用Biolog表型芯片技术分析其对180种碳源和90种氮源物质的代谢情况。结果显示:碳代谢中,菌株SYSB-03对多种碳源,如D-甘露醇、D-果糖、麦芽糖、果糖、麦芽三糖、D-纤维二糖和海带多糖的利用和代谢均高于HLL5-2和10HU-7B;而10HU-7B对奎尼酸、L-山梨糖和D-氨基葡萄糖的代谢要高于其他两个菌株。氮源方面SYSB-03对L-蛋氨酸、D-氨基葡萄糖和D,L-a-氨基-N-丁酸的代谢要强于10HU-7B,其余代谢相当。已有研究表明D-甘露醇、麦芽糖和果糖等物质对于真菌的抗逆性、孢子的萌发和菌丝的生长有一定的促进作用,尤其是麦芽糖可能由于与某些胞外酶的分泌有关,这很有可是SYSB-03具有强致病力的原因。
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