多管藻藻胆体中核—膜连接多肽的分析

来源 :烟台大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:jievons
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本实验以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,利用蔗糖密度梯度离心的技术方法,在高盐条件下提取、分离、纯化藻胆体。利用亚超速蔗糖密度梯度离心,从2%(v/v)Triton X-100增溶和无Triton X-100增溶的两种多管藻藻胆体提取液中分离制备出了两种位于0.2 mol/L密度带、结构完整的藻胆体。与Trion X-100增溶后制备的藻胆体(NTM-PBSs)相比,无Trion X-100增溶的藻胆体(TM-PBSs)表现出叶绿素a-蛋白复合物的光吸收和荧光光谱特征,表明TM-PBSs是带有类囊体膜Chl a-蛋白复合物的藻胆体。在蔗糖密度梯度超速离心中,TM-PBSs和NTM-PBSs均被进一步分离成2个结构相对稳定的藻胆体组分:一个是位于0.8 mol/L梯度的含量较高、密度较小的藻胆体组分,另一个是位于1.2 mol/L梯度的含量较小、密度较大的藻胆体组分。在TM-PBSs和NTM-PBSs样品SDS-PAGE结果分析中,确定了两个符合藻胆体中核-膜连接多肽(LCM)结构特征的蛋白,分子质量分别为86.0 kDa和98.9 kDa。当含类囊体膜藻胆体TM-PBSs解离后,这两种蛋白表现为不同的去向:98.9 kDa的蛋白与类囊体膜的结合较强,更趋向于进入类囊体膜组分;而86.0 kDa蛋白与类囊体膜结合较弱,更趋向于分布在藻胆蛋白组分中。2-D SDS-PAGE分析结果显示,98.9kDa和86.0 kDa两个蛋白不携带藻胆蛋白有色亚基,应为两种分子质量不同的LCM。尿素变性等点聚焦(Urea-IEF)测得86.0LCM98.9LCM的等电点(pI)分别位于pH 6.05.0和pH 7.07.5内。经2-D SDS-PAGE分析进一步确定了具有弱碱性pI(?7.25)、分子质量98.9 kDa、含有藻蓝胆素发色团的有色蛋白是最符合核-膜连接多肽LCM结构(碱性pI、携带PCB、具有80 kDa120 kDa分子质量)特性的蛋白,即98.9LC7.2 M5。在Urea-IEF中位于藻胆蛋白亚基区域、分子质量86.0 kDa的有色蛋白,所表现的弱酸性pI(?5.35)是否有来自弱酸性亚基的影响还需进一步研究确定。在Blue-native PAGE和hrClear-native PAGE非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中均观察到了可能为AP-LCM组分蛋白带,为了进一步确定所观察到的这些蛋白中是否含有98.9LCM86.0LCM及AP亚基APα和APβ,还需进行2-D SDS-PAGE予以确定。
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