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背景:Artemin(ARTN)是一种星形胶质细胞系起源的神经营养因子,参与了人类多种生理和病理进程。新近研究发现ARTN对恶性肿瘤的发生发展也发挥了促进作用。另一方面,研究发现micro RNAs(mi RNAs)通过抑制靶m RNA的翻译或降解靶m RNA负性调节基因的表达,从而参与机体生命过程中一系列的重要进程,包括恶性肿瘤中多种细胞因子表达的调控。然而,ARTN在人喉鳞状细胞癌中的角色和作用机制尚未见报道。本课题首先观察ARTN及其受体在人喉鳞状细胞癌中表达及临床意义,并且进一步分析ARTN对人喉癌细胞侵袭、迁移和增殖的影响;其次,观察mi RNA合成重要因子Dicer在喉癌中表达及其意义,进一步筛选并验证调控ARTN表达的特异性mi RNA,探讨mi RNA对ARTN调控的分子机制。方法:(1)运用免疫组化的方法检测76例石蜡包埋喉鳞状细胞癌及26例喉息肉样本中ARTN及其受体GFRα1的表达情况,分析ARTN和GFRα1表达对喉鳞状细胞癌患者的临床病理意义及预后意义;通过Real-time PCR方法检测16例喉鳞状细胞癌及14例喉息肉新鲜样本中ARTN及其受体GFRα1的表达。(2)用脂质体介导的转染方法将ARTN小干扰RNA(si RNA)转染人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2,设立阴性对照;通过MTS试剂盒和Transwell侵袭实验检测细胞增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。(3)运用免疫组化方法检测76例石蜡包埋喉鳞状细胞癌及26例喉息肉样本中Dicer的表达水平,喉鳞状细胞癌Dicer表达水平与患者临床病理特征及预后的相关性。(4)利用生物信息学方法预测靶向ARTN的微小RNA,并进行实验验证:①对Hep-2细胞分别转染mi RNA模拟物(mimics)、抑制物(ASO)和相应对照(negative control)后,通过real-time PCR检测转染后ARTN表达的改变。②克隆ARTN基因3′UTR,将其与质粒psi CHECK-2(含荧光素酶报告基因)连接后,与该mi RNA共转染Hep-2,做荧光素酶报告实验(Luciferase Reporter Assay)验证ARTN是该mi RNA的直接靶基因。结果:(1)喉鳞状细胞癌石蜡组织中ARTN和GFRα1的表达显著高于喉息肉组织(P<0.05);ARTN和GFRα1的表达与喉鳞状细胞癌的p TNM分期呈显著正相关(P<0.05),与患者预后呈显著负相关(P<0.05);相关性分析表明ARTN表达与GFRα1的表达呈显著正相关(P<0.05);喉鳞状细胞癌新鲜样本ARTN和GFRα1的表达也显著高于喉息肉组织(P<0.05)。(2)使用特异性si RNA下调Hep-2细胞内源性ARTN表达后,细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.01)。(3)Dicer在喉鳞状细胞癌中的表达显著高于其在喉息肉中的表达水平(P<0.05);Dicer的表达水平与肿瘤的p TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05);KM生存曲线提示Dicer表达水平与喉鳞状细胞癌患者的生存时间密切相关(P<0.05)。(4)生物信息学软件Targetscans预测mi R-223可能靶向ARTN基因;外源性转染Hep-2细胞mi R-223 mimics可以显著下调ARTN表达,外源性转染Hep-2细胞mi R-223 ASO可以显著上调ARTN表达;荧光素酶报告实验证实mi R-223与ARTN的3′UTR直接相互作用。结论:(1)ARTN及其受体在喉鳞状细胞癌中表达失调,对喉鳞状细胞癌的发生和发展可能发挥了重要作用。(2)mi RNA可能参与了喉鳞状细胞癌ARTN表达的调控,ARTN是mi R-223的直接靶基因。