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有机磷类农药具有高效、低毒、低残留等特点,在保证农作物增产保丰的同时,长期大量使用所造成的环境污染已不容忽视。环境微生物降解具有高效率、低成本、无二次污染、降解彻底等优点,是修复有机磷农药污染土壤的有效途径之一。本研究分别从湖北沙隆达农药厂、黄冈棉田、荆州农田等不同污染环境土壤中取样,以甲胺磷(MAP)、甲基对硫磷(MP)农药作为受试农药,通过富集培养,筛选分离到多株降解菌。选取甲胺磷降解菌HS-A32、甲基对硫磷降解菌HS-D38为实验菌株,对其进行了生理生化及16S rDNA鉴定,并对降解特性进行了研究。研究表明,HS-A32能以甲胺磷为唯一的碳源和氮源生长。通过薄层色谱(TLC)及高效液相色谱(HPLC)对MAP降解进行了定性和定量研究。结果表明,HS-A32菌能以MAP作为唯一的碳源和氮源生长。接种该菌于500mg/L的MAP无机盐液体培养基中,35℃、150rpm振荡培养3d,对甲胺磷降解率可达86%,是一株甲胺磷高效降解菌。外加易利用的碳、氮源能促进该菌对甲胺磷的降解。薄层色谱结果表明,HS-A32降解MAP过程中有NH4+生成,说明该菌产生的降解酶能切断P—N键而获得生长所需的N源。提取HS-A32基因组DNA,设计特异性引物,PCR扩增出16S rDNA片断。测序并进行BLAST检索,Clustal W软件进行序列比对,PHYLIP软件构建系统进化树。结果表明HS-A32菌株与不动杆菌属(Acinetobacter)的同源性为98%。结合生理生化鉴定结果,确定HS-A32菌属不动杆菌属(Acinetobacter),命名为Acinetobacter sp.HS-A32。降解广谱性实验表明,HS-A32对三唑磷、甲基对硫磷、辛硫磷、敌敌畏均有不同程度的降解,是一株有机磷广谱降解菌。降解菌HS-D38降解甲基对硫磷的最适温度为35℃,最适pH值为7.0,MP的最适降解浓度为200mg/L。降解动态研究表明,HS-D38降解MP的同时,也能降解中间产物对硝基酚(PNP),可能具有矿化MP的能力。生理生化及16S rDNA鉴定结果表明,HS-D38与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的同源性为98.0%,初步鉴定HS-D38菌为铜绿假单胞菌属(Pseudomonas aeruginosa),命名为Pseudomonas aeruginosa sp.HS-D38。底物利用实验表明,HS-D38具有广泛的底物适应性,能利用多种碳、氮源生长,且能降解二苯胺、对苯二酚等芳香族化合物。分别以不同浓度的SDS和吖啶橙(AO)进行质粒消除,以确定降解酶编码部位。结果表明,适宜浓度的SDS和吖啶橙(AO)均能得到HS-D38质粒消除子。降解实验证实,质粒消除菌不能降解MP和PNP,推测编码降解酶基因与质粒有关。