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中华蜜蜂是我国特有的蜜蜂资源,长期适应于我国的地理特征和气候条件,在我国年均饲养量约200-300万群,约占总饲养蜂群的三分之一,具有其它蜜蜂种类不可替代的应用价值和资源优势。 蜂王浆是工蜂头部的咽下腺、上颚腺和脑后腺分泌的对蜂王的营养和发育有着重要影响的物质,蜂王浆在蜜蜂的级型分化中起着重要作用,蜂王浆的成分随地区、花期不同而有一定的变化,其平均含水量60%～70%,粗蛋白12%～15%,总糖10%～16%,脂类3%～6%,其余为维生素、盐、游离氨基酸和未确定物质。 蜂王浆作为纯天然的保健品,对人类具有很高的营养保健作用,如免疫调节作用、抗疲劳、防肿瘤、改善睡眠等。蜂王浆成分及其功能研究一直是国内外蜂学研究的重要领域。 蛋白质约占王浆干物质的50%。MRJPs(major royal jelly proteins)指的是王浆中的主要蛋白,占王浆总蛋白的82%～90%,MRJPs可能是蜂王浆中重要的营养及生理调节因子。西方蜜蜂MRJPs的研究已部分验证了这一观点。至今已发现MRJPs蛋白家族共有8个成员。 本研究构建了中华蜜蜂头部cDNA文库,得到几个MRJPs的克隆,并且研究了Apisimin在大肠杆菌中以及MRJP2在昆虫细胞中的表达。丰富了蜜蜂MRJPs的生物学研究的内容。 MRJP1、MRJP2、MRJP3、MRJP3a的序列分析 通过对中华蜜蜂(Apis cerana cerana)8日龄工蜂头部cDNA文库的测序,获得MRJP1、MRJP2、MRJP3、MRJP3a基因克隆。进一步对克隆分析表明MRJP1基因cDNA全长为1451nt,包含一个1302nt、可以编码433个氨基酸的ORF。该ORF与意大利蜜蜂MRJP1基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为93%和90%,与印度蜜蜂MRJP1基因核苷酸和氨基酸的同源性都为99%。MRJP2基冈cDNA全长为1652nt,包含一个1392nt、可以编码463个氨基酸的ORF,该ORF与意大利蜜蜂MRJP2基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为89%和84%,与印度蜜蜂MRJP2基因核苷酸和氨基酸的同源性都为99%。MRJP3基因cDNA全长为2062nt,包含一个1827nt、可以编码608个氨基酸的ORF,中华蜜蜂MRJP3与意大利蜜蜂、印度蜜蜂、大蜜蜂、小蜜蜂氨基酸的同源性分别为82%、99%、77%、73%。MRJP3a基因cDNA全长2150bp,含一个长1719bp的开放阅读框(ORF),可以编码一个含572个氨基酸残基,MRJP3是多态性的蛋白,MRJP3a是MRJP3的一种变体,他们的N端同源性很高,C端有34个五肽组成的重复单元。