杨生褐盘二孢菌(Marssonina brunnea)存在两个专化型,从形态特征和现有的一些核酸分子序列标记上不易区分。研究孢子发育过程的差异性,应用新的技术手段对病原菌的鉴定以及其与寄主的互作关系为研究病原菌与寄主的互作关系提供了新思路。本研究进行了 4个方面的内容:利用采集自不同来源的病原菌进行总DNA为模板的PCR扩增获得ITS序列,构建系统发育树,以ITS2的二级结构来区分两个专化型。采用荧光增白剂进行孢子在不同条件下发育过程的观察。分别构建两个专化型菌株与其亲和性寄主的互作体系。分别测定两个专化型菌株各3个菌株孢子发育过程的分泌蛋白,分析分泌蛋白的差异性。结果表明:(1)不同来源的专化型菌株之间的菌落和孢子基本形态没有明显区别。构建的ITS序列系统发育树只能说明杨生褐盘二孢种间关系,ITS序列难以准确区分专化型。两专化型菌株ITS2二级结构之间其结构模型相同,但存在多个位点的碱基差异。采用ITS2二级结构联合ITS序列系统发育树可以更有效地区分杨生褐盘二孢菌两个专化型。(2)通过分别测定两专化型菌株各5个菌株,每株进行50个孢子的生物学重复,采用统计学分析法,发现单芽管比多芽管长且窄,多芽管短且宽,但区分不稳定;两专化型菌株孢子在水中都可以完成整个发育过程;在玻璃纸上也可以完成整个发育过程且与水中相同。(3)通过接种试验,分别建立两个专化型菌株与其亲和性寄主的互作体系。使用荧光显微镜进行病原菌侵染过程观察,发现亲和性与非亲和性寄主之间,孢子发育过程存在明显差别;在亲和性寄主上,整个发育过程均可见;在非亲和性寄主上,发育过程不完整,发育到附着胞阶段后,停止发育,有些连续产生附着胞,直至停止生长。(4)以两专化型各3株菌为材料,分别测定孢子在玻璃纸上发育过程的分泌蛋白,分析孢子在整个发育过程分泌蛋白的差异性。经分析测定所得的蛋白中含有20个Ecp家族的蛋白,其中8个已被前人验证为效应蛋白,12个为推断的效应蛋白。