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研究目的：进一步探讨补肾中药淫羊藿防治哮喘的作用：对哮喘的主要效应细胞——嗜酸粒细胞(Eosinophil，Eos)的趋化反应性是否有调节作用：①能否下调Eos表面CCR3及与其结合的主要趋化因子eotaxin、RANTES、MCP-3在肺组织的表达(同步检测核酸表达、蛋白表达水平)，而直接影响Eos的趋化反应性；②能否通过调节细胞因子水平而间接影响Eos的趋化反应性；③以及这种调节作用是否存在量效关系。材料与方法：动物：动物采用清洁级Brown Norway大鼠，雄性，3～6月龄。光照时间固定，恒温(25℃)，水、食物自由摄取。药物：淫羊藿(Epimedium)采用辽宁产朝鲜淫羊藿，批号：060517；地塞米松注射液购自上海通用药业股份有限公司，批号：060110。方法：实验分6组，每组12只。A组：正常对照组；B组：哮喘组，d1皮下注射卵蛋白(ovalbumin，OA)致敏，d15以OA雾化激发致喘，每天1次，连续14天；C组：地塞米松组；D组：低剂量淫羊藿组；E组：中剂量淫羊藿组；F组：高剂量淫羊藿组。C、D、E、F组造模方法同B组，C组d15天开始每天雾化前1h，腹腔注射地塞米松0.5mg／kg，连续14天；D、E、F组d15天开始每天雾化前1h分别给予不同剂量的淫羊藿灌胃，连续14天。所有大鼠在予最后一次相应处理4h后麻醉采取标本。分离支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中的嗜酸粒细胞(eosinophil，Eos)，以real-time PCR法检测Eos表面CCR3mRNA的表达；酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测BALF和血清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-4、IL-5、IFN-γ浓度；real-time PCR法检测肺组织eotaxin、RANTES、MCP-3 mRNA的表达；western blot法检测肺组织eotaxin、RANTES的蛋白表达。结果：1．各组大鼠Eos表面CCR3mRNA的表达：正常对照组、哮喘组、地塞米松组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组Eos表面CCR3mRNA的表达分别为：0.0081±0.0047、0.0343±0.0107、0.0126±0.0055、0.0264±0.0163、0.0205±0.0110、0.0203±0.0125，哮喘组和正常对照组比较，Eos表面CCR3mRNA的表达明显增加(P＜0.01)；各用药组除低剂量中药组外，其余各组与哮喘组比较，CCR3mRNA的表达均降低(P＜0.05)；中剂量中药、高剂量中药与地塞米松组比较，CCR3mRNA的表达较高，但差别无统计学意义(P＞0.05)。2．各组大鼠肺组织eotaxin、RANTES、MCP-3 mRNA的表达各组大鼠肺组织eotaxin mRNA的表达：正常对照组、哮喘组、地塞米松组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组的值分别为：0.0099±0.0091、0.2477±0.0063、0.0175±0.0068、0.2363±0.0026、0.1950±0.0075、0.0295±0.0024，哮喘组eotaxin mRNA的表达较正常对照组明显升高(P＜0.01)；与哮喘组比较，地塞米松组和高剂量中药组Eotaxin mRNA表达明显降低(P＜0.01)；各用药组两两比较显示低剂量中药组、中剂量中药组较地塞米松组、高剂量中药组的表达显著增加(P＜0.01)；高剂量中药组与地塞米松组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。各组大鼠肺组织RANTES mRNA的表达：正常对照组、哮喘组、地塞米松组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组的值分别为：0.0192±0.0133、0.7707±0.0225、0.0210±0.0079、0.0591±0.0278、0.0638±0.0345、0.0259±0.0216，哮喘组RANTES mRNA的表达较正常对照组明显增加(P＜0.01)；用药组RANTES mRNA的表达均显著低于哮喘组(P＜0.01)；各用药组间两两比较差异无统计学意义(P＞0.05)。各组大鼠肺组织MCP-3 mRNA的表达：正常对照组、哮喘组、地塞米松组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组的值分别为：0.0113±0.0051、0.1307±0.0240、0.0339±0.0200、0.0789±0.0337、0.0533±0.0325、0.0565±0.0302，哮喘组MCP-3 mRNA的表达较正常对照组明显增加(P＜0.05)；地塞米松组、中剂量中药组、高剂量中药组与哮喘组比较，MCP-3 mRNA的表达下降(P＜0.05)；各用药组间两两比较未见统计学差异(P＞0.05)。3．各组大鼠肺组织eotaxin、RANTES的蛋白表达各组大鼠肺组织eotaxin的蛋白表达：正常对照组、哮喘组、地塞米松组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组的值分别为：0.1155±0.1261、0.6896±0.4581、0.2371±0.1659、0.6837±0.5089、0.5732±0.3220、0.3374±0.2684，与正常对照组比较，哮喘组、低剂量中药组、中剂量中药组的蛋白表达明显增加(P＜0.05)，而地塞米松组和高剂量中药组虽较正常对照组高，但无统计学差异；与哮喘组比较，地塞米松组的蛋白表达下降(P＜0.05)；中药各剂量组的蛋白表达虽有下降，但与哮喘组比较无统计学差异(P＞0.05)；与地塞米松组比较，低剂量中药组的蛋白表达表达增加(P＜0.05)。各组大鼠肺组织RANTES的蛋白表达：正常对照组、哮喘组、地塞米松组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组的值分别为：0.3945±0.3470、0.7161±0.5167、0.5709±0.3509、0.7155±0.4240、0.5949±0.2579、0.5959±0.2311，统计分析显示各组蛋白表达无统计学差异(P＞0.05)。4．各组细胞因子的水平各组血清、BALF中TNF-α的水平：各组BALF中TNF-α的水平均较血清中高，与正常对照组比较，哮喘组TNF-α的水平在血清、BALF中均显著升高(血清中P＜0.01，BALF中P＜0.05)；与哮喘组比较，各用药组血清TNF-α的水平明显下降(P＜0.01)；但在BALF中没有这种变化。各用药组间两两比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。各组血清、BALF中IL-6的水平：两两比较显示哮喘组IL-6无论在血清中还是BALF中均高于正常对照组，且具统计学意义。各用药组血清IL-6值均明显低于哮喘组，具显著性统计学差异(P＜0.01)。但在BALF中各用药组值虽均较哮喘组低，但无统计学意义(P＞0.05)。各剂量中药组与地塞米松组两两比较，无论血清还是BALF中IL-6值的差异均无统计学意义(P＞0.05)。各组血清、BALF中IL-4的水平：各组BALF中IL-4的水平均较血清中高，IL-4在血清和BALF中的变化较一致，即与正常对照组比较，哮喘组IL-4的水平在血清、BALF中均显著升高(P＜0.01)；与哮喘组比较，地塞米松组、中剂量中药组、高剂量中药组血清和BALF中IL-4的水平均降低(P＜0.05)；与地塞米松组比较，血清低剂量中药组IL-4的水平明显升高(P＜0.01)。各组血清、BALF中IL-5的水平：各组BALF中IL-5的水平均较血清中高，IL-5在血清和BALF中的变化较一致，即与正常对照组比较，哮喘组IL-5的水平在血清、BALF中均显著升高(P＜0.01)；与哮喘组比较，地塞米松组、高剂量中药组的值下降(血清中P＜0.01，BALF中P＜0.05)；各用药组间两两比较无明显统计学差异(P＞0.05)。各组血清、BALF中IFN-γ的水平：各组BALF中IFN-γ水平较血清中高，与正常对照组比较，哮喘组IFN-γ的水平在血清、BALF中均下降(血清中P＜0.01，BALF中P＜0.05)；与哮喘组比较，地塞米松组和高剂量中药组血清IFN-γ水平明显上升(P＜0.01)，但在BALF中无此变化；与地塞米松组比较，中剂量中药组血清IFN-γ水平下降(P＜0.05)，而BALF中无此差异；各剂量中药组间两两比较无统计学差异(P＞0.05)。结论：通过对上述实验结果的分析，我们认为中药淫羊藿可以有效调节Eos趋化反应性，具体表现为它能下调哮喘大鼠Eos表面CCR3mRNA表达，使CCR3的主要配体eotaxin、RANTES、MCP-3 mRNA在肺组织的表达下降，并可能进一步影响eotaxin的蛋白表达，而且在减少对CCR3及其配体表达有促进作用的细胞因子TNF-α、IL-4、IL-5生成的同时，增加保护性因子IFN-γ的释放。至于在本实验中我们观察到地塞米松组与中、高剂量淫羊藿组的作用大多无明显统计学差别，考虑原因可能是我们使用的激素剂量较小，所以还不能很好发映出二者的作用差别程度。而淫羊藿各剂量组间的检测指标显示中、高剂量淫羊藿组的作用强于低剂量淫羊藿组，中剂量与高剂量淫羊藿组比较无明显差别，说明淫羊藿对Eos趋化反应性的调节作用有一定的剂量依赖性，但尚需体外实验进一步证实。