目的P物质（substance P，SP）预先给药对正常乳鼠心肌细胞以及高糖孵育乳鼠心肌细胞缺氧/复氧（Anoxia-reoxygenation，A/R）损伤的影响。方法（1）体外培养乳鼠心肌细胞模型的建立及糖尿病模型和缺氧/复氧损伤模型的制作。选用1~3日龄的健康SD大鼠，雌雄不拘，用于心肌细胞体外培养模型的建立，采用免疫细胞化学SABC法进行心肌细胞鉴定；使用25mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养基孵育心肌细胞，制作糖尿病模型；将培养72h的心肌细胞更换缺氧液后置于密闭缺氧盒中培养3h模拟缺氧，随后更换培养液在正常培养箱中培养2h模拟复氧建立缺氧/复氧损伤模型，测定缺氧液及密闭缺氧盒中的氧分压验证缺氧情况。（2）采用免疫荧光技术对心肌细胞速激肽1型受体（neurokinin-1receptor，NK-1）的分布表达进行定位。（3）SP对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。取12孔心肌细胞随机分为4组（n=3）：对照组；A/R组，不加任何药物，只进行缺氧/复氧；SP+A/R组，给予SP（10-7mol/L）作用1h后进行缺氧/复氧；SP+D-SP+A/R组，给予SP（10-7mol/L）和NK-1受体拮抗剂D-SP（10-6mol/L）作用1h后进行缺氧/复氧。每组分别采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组心肌细胞蛋白中、缺氧液中和复氧液中的半胱氨酸天冬蛋白酶3（caspase-3）活性，采用LDH检测试剂盒检测各组缺氧液和复氧液中的LDH释放量。（4）SP对高糖孵育乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。分离新生SD大乳鼠心脏为细胞悬液接种于细胞培养板，分别用正常糖和高糖培养基进行孵育，72h后进行缺氧/复氧处理，细胞随机分为5组，分别为正常对照组，高糖对照组，高糖A/R组，高糖SP+A/R组和高糖SP+D-SP+A/R组。复氧后分别测定细胞凋亡率、缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH释放量。（5）SP对高糖孵育乳鼠心肌细胞缺氧/复氧后细胞内钙离子浓度的影响。分离新生SD大乳鼠心脏为细胞悬液接种于细胞培养板，分别用正常糖和高糖培养基进行孵育，72h后进行缺氧/复氧处理，细胞随机分为5组，分别为正常对照组，高糖对照组，高糖A/R组，高糖SP+A/R组和高糖SP+D-SP+A/R组。复氧后用fluo-3AM孵育心肌细胞，随后于激光共聚焦显微镜下检测细胞内钙离子荧光值。结果（1）乳鼠心肌细胞体外培养模型建立成功，经细胞鉴定，心肌细胞占所培养细胞总数的95%以上。缺氧液和缺氧密闭盒中氧分压均＜10mmHg。（2）NK-1受体主要分布于心肌细胞胞质中，在核内也有少量NK-1受体表达。（3）与对照组比较，A/R组的凋亡率明显升高，缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH含量均升高（P﹤0.01）；与A/R组比较，SP+A/R组的凋亡率明显降低，缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH含量均降低（P﹤0.01）；与SP+A/R组比较，SP+D-SP+A/R组的凋亡率明显升高，缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH含量均升高（P﹤0.01）。（4）与正常对照组比较，高糖对照组的凋亡率明显升高，缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH含量均升高（P﹤0.01）；与高糖对照组比较，高糖A/R组的凋亡率明显升高，缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH含量均升高（P﹤0.01）；与高糖A/R组比较，高糖SP+A/R组的凋亡率明显降低，缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH含量均降低（P﹤0.05）；与高糖SP+A/R组比较，高糖SP+D-SP+A/R组的凋亡率明显升高，缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH含量均升高（P﹤0.05）。（5）与正常对照组比较，高糖对照组的细胞内钙离子荧光值无明显变化（P＞0.05）；与高糖对照组比较，高糖A/R组的钙离子荧光值明显升高（P﹤0.01）；与高糖A/R组比较，高糖SP+A/R组的细胞内钙离子荧光值无明显变化（P＞0.05）；与高糖SP+A/R组比较，高糖SP+D-SP+A/R组的细胞内钙离子荧光值无明显变化（P＞0.05）。结论（1）缺氧/复氧可引起心肌细胞损伤，SP预先给药可降低心肌细胞在缺氧/复氧过程中的损伤且该作用可能由NK-1受体介导。（2）高糖孵育可造成心肌细胞损伤，缺氧/复氧可对高糖孵育的大鼠心肌细胞进一步产生损伤，SP预处理可显著减轻该过程中的损伤，且该作用可能由NK-1受体介导（3）高糖孵育并未造成心肌细胞内钙离子浓度的明显升高，缺氧/复氧可造成高糖孵育心肌细胞钙离子浓度的升高，本研究未观察到SP对高糖孵育心肌细胞在缺氧/复氧过程中抑制钙超载方面的明显作用。