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磺胺类药物（sulfonamides，SAs）是一类人工合成的抗菌药物，在畜牧业生产中被广泛应用。但由于磺胺类药物的不合理使用而导致其在动物源性食品中残留，并通过食物链进入人体，给人体健康带来了潜在的威胁。目前检测磺胺类药物残留的常用方法主要是高效液相色谱法（HPLC）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。该方法灵敏、准确，但需要昂贵的设备，需要专业人员操作，而且操作烦琐，检测时间长，成本高，推广使用受到一定限制。 胶体金免疫层析方法是一种新型的检测方法，它是一种以条状纤维层析材料为固相载体，利用毛细作用原理，借助于胶体金显色的免疫学反应。这种方法具有操作简单、快速，分析结果清楚、易于判断，不需要专业人员操作，检测费用低等优点，因此，非常适用于现场检测以及自动化检测分析。该技术在医学的快速检测领域得到了迅猛发展，现在已开始应用于药物残留检测。 本研究针对目前磺胺类药物残留检测方法中存在的问题，运用胶体金免疫层析技术，采用竞争反应原理，进行了动物源性食品中磺胺嘧啶及磺胺类药物残留的快速检测方法的建立和应用研究，取得了如下研究成果。 1．磺胺嘧啶及磺胺类药物人工抗原的合成与鉴定采用重氮化法将磺胺嘧啶（SD）与牛血清白蛋白（BSA）进行偶联，得到不同偶联比的BSA-SD偶联物，作为磺胺嘧啶竞争物；采用混合酸酐法将N－磺胺－4－氨基苯甲酸（SUL，包括磺胺类药物的母核结构）与人血清白蛋白（HSA）进行偶联，得到不同偶联比的HSA-SUL偶联物，作为磺胺类药物的竞争物。可见光－紫外扫描鉴定表明成功获得了上述不同偶联比两种偶联物。 2．抗体的制备与纯化用本室以前研制成功的抗磺胺嘧啶和抗磺胺类药物母核结构的杂交瘤细胞注射小鼠，产生腹水，通过辛酸-硫酸铵法纯化，获得了高纯度的抗磺胺嘧啶及磺胺类药物单克隆抗体；同时将BSA及经饱和硫酸铵粗提和G-200过柱纯化的鼠IgG免疫健康家兔，经过多次免疫，制备了兔抗BSA及兔抗鼠IgG的高免血清。对所得高免血清分别采用饱和硫酸铵粗提和G-200过柱纯化，最后得到了纯化的兔抗BSA及兔抗鼠IgG多克隆抗体。 3．胶体金及免疫胶体金的制备本研究采用柠檬酸三钠还原法，成功确立了胶体金的制备条件；并利用制备的胶体金，对前述制备的BSA-SD偶联物，抗SD及SUL单克隆抗体进行了胶体金标记条件的摸索，成功确立了BSA-SD偶联物，抗SD及SUL单克隆抗体金标记条件。BSA-SD偶联物、抗SD及SUL单克隆抗体最佳标记pH值分别为5.5、8.0、8.0，最佳标记量分别为20μg BSA-SD/mL胶体金、3.0μg抗SD单克隆抗体/mL胶体金、6.0μg抗SUL单克隆抗体/mL胶体金。 4．磺胺嘧啶残留免疫层析快速检测方法的建立以胶体金标记抗SD单克隆抗体作为示踪物，用包被于检测线上的磺胺嘧啶竞争物BSA-SD（1：10）作为捕获物，成功地建立了磺胺嘧啶残留胶体金免疫层析快速检测方法。该方法检测磺胺嘧啶残留具有好的特异性，检测灵敏度至少为5ng/mL，肉眼判定检测限为10ng/mL；该方法天内（Intra-day）变异系数在6.1%-9.9%之间，天间（Inter-day）变异系数在6.9%-10.3%之间，均小于15%；在不同动物源性食品（鸡肉、鸡蛋、鸡肝、猪肉、猪肝、牛奶、蜂蜜）中添加磺胺嘧啶的回收率在68%－113%范围内，变异系数均小于15%。 5．磺胺类药物残留免疫层析快速检测方法的建立以胶体金标记抗SUL单克隆抗体作为示踪物，用包被于检测线上的磺胺类药物竞争物HSA-SUL（1：20）作为捕获物，成功地建立了磺胺类药物胶体金免疫层析快速检测方法。该方法与磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺嘧啶（SD）具有较好的交叉反应率，分别为100%、101%、114%、64%；该方法检测SMM、SMD、SDM的灵敏度至少为10ng/mL，肉眼判定检测限为20 ng/mL，检测SD灵敏度至少为10ng/mL，肉眼判定检测限为40ng/mL；该方法天内（Intra-day）变异系数在8.1%-14.3%之间，天间（Inter-day）变异系数在7.9%-12.3%之间，均小于15%；在不同动物源性食品（鸡肉、鸡蛋、鸡肝、猪肉、牛奶）中添加SMM、SMD、SDM回收率在79%-103.3%范围内，添加SD的回收率在44.8%-61.9%之间，变异系数均小于15%。 6．磺胺嘧啶及磺胺类药物残留快速检测试剂盒的制备及初步应用用建立的快速检测方法成功地研制出磺胺嘧啶及磺胺类药物残留快速检测试剂盒。用该试剂盒与HPLC或ELISA对来自动物试验的鸡肉和鸡蛋样品的进行对比检测，结果表明磺胺嘧啶残留快速检测试剂盒与HPLC及ELISA具有较好的符合率；磺胺类药物残留快速检测试剂盒与HPLC也具有有较好的符合率。用本试剂盒对来自市场的240份样品进行检测，并通过HPLC对检测结果复核，结果表明市场样品中存在磺胺嘧啶及磺胺类药物残留，磺胺嘧啶残留快速检测试剂盒对磺胺嘧啶残留检测较磺胺类药物残留快速检测试剂盒更加准确；两种试剂盒完全可以作为常规方法用于市场上动物源性食品中磺胺嘧啶及磺胺类药物残留的快速检测。