林可霉素产生菌的基因改造

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林可霉素(Lincomycin)是由林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)产生的一类林可糖胺类抗生素,具有抗革兰氏阳性菌的作用。在林可链霉菌基因功能不完全明确,国内外研究报道较少的情况下,探索式的对林可链霉菌加以基因改造,期望提高林可霉素发酵产量,得到适应工业化发酵生产的菌株。本论文在林可霉素生物合成关键基因lmbH终止密码子后插入了一段去掉启动子的安普霉素抗性基因apr,使apr和lmbH处于同一转录单位。希望apr在lmbH的启动子的带动下转录并且表达,根据重组菌株抗安普霉素能力的强弱建立林可霉素高产菌株筛选模型。林可链霉菌发酵实验证实重组菌株具有了安普霉素抗性,但对浓度的敏感度较差,林可霉素的发酵产量下降为33%,因此该实验方案并未获得成功。本论文构建了带有红霉素抗性基因启动子PermE的透明颤菌血红蛋白基因vgb,并将它整合进林可链霉菌黑色素生物合成基因melC中,希望失活melC的同时表达血红蛋白VHb。实验证实重组菌株不再产生黑色素,且VHb得到表达,表现出生物学活性。不同装瓶量摇瓶发酵实验表明在正常溶氧条件下重组菌株的林可霉素产量同对照菌株相近,但在低氧条件下表现出远高于对照菌株的林可霉素生产能力,说明该重组菌株具有在低溶氧条件下保持一定发酵水平的优良特性,具备工业化发酵生产的要求。因此该实验方案获得成功。
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