不同酶切方式制备壳低聚糖体外抗幽门螺杆菌的研究

来源 :温州医学院 温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuxinliuyun
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目的:研究壳低聚糖体外对幽门螺杆菌的抑菌作用,实验结果将为壳低聚糖作为候选的抑菌保健药提供重要的理论依据,为药物的临床应用提供实验依据,凭借丰富甲壳资源优势,利用废弃资源服务人类,大大提高产品的附加值,以创高经济价值和增加市场应用前景。   方法:(1)采用平板涂布法或者密集划线法接种细菌在选择性哥伦比亚血培养基上,微需氧条件下培养,通过观察菌落形态和显微镜下镜检菌体形态以及进行快速尿素酶试验RUT、过氧化氢酶试验和氧化酶试验等生化反应以鉴定疑似幽门螺杆菌菌落,并将其分离纯化传代。(2)采用药敏纸片琼脂扩散法将沾取不同浓度、不同酶切方式以及不同pH值条件的样品的纸片平贴在涂布好菌液的培养基表面,对照为沾取灭菌生理盐水的纸片,倒置塑料平皿在密封培养盒中,迅速置入微需氧产气袋并于37℃CO2培养箱里培养2~3天,用游标卡尺测量抑菌环直径,不同条件的每种样品各做5次,取其平均值,统计学LSD-t检验分析方法处理实验数据。   结果:(1)选择性哥伦比亚血培养基上可见透明针尖样的菌落或者半透明的菌苔,镜检可见革兰氏阴性呈海鸥状、S状弯曲菌或者弧形杆状菌的典型幽门螺杆菌菌体形态,快速尿素酶试验RUT、过氧化氢酶试验和氧化酶试验等生化反应均为阳性特征。(2)以壳聚糖内切酶降解的壳低聚糖均有较好的抑菌能力,其中以数均分子量为1500的壳低聚糖效果最好,其抑菌效果在分子量1.5kDa~10kDa范围内随分子量减小而增强(P<0.01),并随着浓度增大而增强(P<0.01),而在pH2.0~4.0范围内随pH值降低而增强(P<0.01)。   结论:(1)微需氧产气袋、湿脱脂棉球、选择性哥伦比亚血培养基和37℃CO2气体培养箱组成的培养环境适宜幽门螺杆菌的生长。(2)由壳聚糖内切酶降解的壳低聚糖在体外对幽门螺杆菌具有抑菌作用,且抑菌效果跟浓度、分子量和pH值相关。
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