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猪肉是我国居民生活中动物蛋白的主要来源,提高猪肉的产量和质量是动物遗传育种工作者长期不懈追求的目标。猪胴体瘦肉大部分来自于骨骼肌,对骨骼肌生长发育的机理和调控进行深入研究有助于推进猪瘦肉性状的分子育种工作。骨骼肌的生长发育是一个十分复杂的生物学过程,受大量转录因子、生长因子和多个信号通路的调控。目前,一些与骨骼肌生长相关的候选基因得以分离和初步功能分析,但要理解骨骼肌生长发育的机理和调控仍需要大量研究工作。胰岛素受体底物1(Insulin receptor substrate-1; IRS-1)是胰岛素受体底物家族中第一个被发现的成员,在骨骼肌组织和褐色脂肪组织有重要作用;含PR结构域基因16(PR domain-containing protein16; PRDM16)是一个转录因子,可能在调节脂肪和肌肉转化中发挥作用;RNAi技术是基因功能研究的有效方法,构建高效的RNAi载体是这一技术的关键。双向启动子的siRNA表达载体是一种有效的RNAi工具。本研究针对猪骨骼肌表达的两个候选基因进行了初步的功能研究,并探讨了一种RNAi新策略,取得了如下结果:
1.通过半定量RT-PCR技术得到了猪IRS-1基因的组织表达谱,该基因在猪的在肾脏、背最长肌、和脑组织中高水平表达;利用PCR-BseGⅠ-PFLP技术对IRS-1基因3257位点的SNP(c.3257C＞A)在通城猪实验实验群体和温氏大白猪群体中进行了基因型检测和性状关联分析。结果表明:在通城猪实验群体中IRS-1和胴体直长显著相关(p＜0.05)。
2.通过半定量RT-PCR技术得到了猪PRDM16基因的组织表达谱,表明该基因在猪的脑组织、肺脏、肾脏、内脂中高水平表达;在该基因中发现一个SNP(c.-3284+171C>T)并提交到了SNP数据库(dbSNP登录号:ss136268362);利用PCR-AciⅠ-PFLP技术在通城猪实验群体和巴克夏×约克夏F2群体中进行了基因型检测和性状关联分析,结果表明在巴克夏×约克夏F2群体中PRDM16基因和眼肌面积呈极显著相关(p＜0.01),和腰背膘厚度及胴体重量呈显著相关(p＜0.05)。
3.构建得到一个H1启动子和U6启动子相向的siRNA表达载体,命名为PH1U6-GFP;将该siRNA表达载体转染入BHK-21细胞系中,发现该载体具有明显的干扰效果。
1.通过半定量RT-PCR技术得到了猪IRS-1基因的组织表达谱,该基因在猪的在肾脏、背最长肌、和脑组织中高水平表达;利用PCR-BseGⅠ-PFLP技术对IRS-1基因3257位点的SNP(c.3257C＞A)在通城猪实验实验群体和温氏大白猪群体中进行了基因型检测和性状关联分析。结果表明:在通城猪实验群体中IRS-1和胴体直长显著相关(p＜0.05)。
2.通过半定量RT-PCR技术得到了猪PRDM16基因的组织表达谱,表明该基因在猪的脑组织、肺脏、肾脏、内脂中高水平表达;在该基因中发现一个SNP(c.-3284+171C>T)并提交到了SNP数据库(dbSNP登录号:ss136268362);利用PCR-AciⅠ-PFLP技术在通城猪实验群体和巴克夏×约克夏F2群体中进行了基因型检测和性状关联分析,结果表明在巴克夏×约克夏F2群体中PRDM16基因和眼肌面积呈极显著相关(p＜0.01),和腰背膘厚度及胴体重量呈显著相关(p＜0.05)。
3.构建得到一个H1启动子和U6启动子相向的siRNA表达载体,命名为PH1U6-GFP;将该siRNA表达载体转染入BHK-21细胞系中,发现该载体具有明显的干扰效果。