论文部分内容阅读
目的：观察上调和下调Notch-1基因表达时人神经胶质瘤细胞的自噬现象，探讨Notch-1基因参与人神经胶质瘤细胞自噬的可能机制。方法：利用表达Notch1-shRNA和Notch-1胞内段（Notch-1intracellular domain,NICD）的慢病毒感染人胶质瘤U251细胞，通过RT-PCR和Western Blotting法鉴定Notch-1表达下调或NICD表达上调的U251细胞；应用单丹（磺）酰戊二胺（Monodansylcadaverine，MDC）染色法观察细胞自噬现象；通过Western-blotting和细胞免疫染色法检测自噬相关蛋白LC-3（microtubule-associated protein1lightchain3，微管相关蛋白1轻链3）和Beclin-1的表达情况。结果：Notch-1RNA干扰慢病毒能有效下调U251细胞Notch-1的表达，而NICD过表达慢病毒能显著上调U251细胞NICD的表达；MDC荧光染色法发现，Notch-1下调的神经胶质瘤U251细胞中可观察到点状自噬囊泡（autophagicvacuoles，AVs），Western-blotting和细胞免疫染色法结果显示，在Notch-1表达下调的神经胶质瘤U251细胞中，自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达增高。结论：Notch-1表达下调的人神经胶质瘤细胞可观察到自噬现象，Notch-1表达下调可能导致LC-3和Beclin-1表达上调而诱导胶质瘤细胞自噬。