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全内反射荧光显微成像利用倏逝波对荧光样品进行照明,由于倏逝波强度在轴向成指数衰减,因此极大抑制了离焦部分荧光分子激发,从而能够获得很高的图像信噪比和对比度,故在单分子荧光成像、表面生物化学、细胞动力学等领域有着广泛的应用。然而在现行方案中,棱镜型方案入射角调整范围大但由于单向照明引入照明阴影和干涉条纹影响成像质量,而物镜型方案可解决单向照明问题但入射角调整范围受物镜结构限制影响实验效果。本课题针对传统方案中单向照明问题和入射角调整范围不能兼顾的问题,开展了将大数值孔径的抛物面反射镜引入全内反射荧光成