禽流感（Avian Influenza,AI）是A型一种禽类的急性、烈性传染病。国家预案规定,一旦爆发高致病性AI,疫点周围3km内的所有家禽要全部扑杀,5km内的家禽应紧急接种疫苗,以建立禽类免疫隔离带。目前,我国防控HPAI的常规途径是注射油乳剂灭活疫苗。但现行油疫苗免疫后机体形成有效抗体滴度的间隙期较长,不能满足紧急情况下快速建立免疫保护的要求。并且油佐剂刺激性大、难吸收,在肉禽宰杀销售之时仍有部分油佐剂残留于机体,严重影响产品质量。美国联邦政府规定,畜禽上市前42d内不得使用任何矿物油乳剂疫苗。因此,寻找一种高效安全,便于紧急接种的新型佐剂势在必行。本试验自制纳米氢氧化铝佐剂,并在此基础上探讨了纳米氢氧化铝与禽流感病毒尿囊液的吸附条件和最佳浓度及该疫苗的质量。本课题内容包括:1纳米氢氧化铝佐剂的制备与检测采用苯扎溴铵-丙三醇-环己烷-AlCl₃溶液的W/O型微乳液配方制备纳米氢氧化铝佐剂粒子,获得经过激光粒度仪测定平均粒径为197.2nm,滴定法检测纳米氢氧化的含量为2mg/mL。从而为进一步验证纳米铝佐剂的免疫学效应提供了物质保证。2纳米氢氧化铝吸附禽流感病毒H5N1灭活疫苗的研制本试验选用了HA试验、荧光RT-PCR、单向放射免疫扩散测定尿囊液中的抗原。测得尿囊液HA=9Log₂,荧光RT-PCR结果为阳性,血凝素含量为3.133μg/ml。这三种方法可以有效地对疫苗的吸附情况进行判断。在选出的最佳吸附环境下,制备具有高吸附率的纳米氢氧化铝佐剂吸附禽流感疫苗。分别用血凝试验HA、络合滴定法,测定抗原和佐剂下沉的转速。以尿囊液与佐剂1:2的体积之比混合,选用不同的温度、吸附时间和佐剂浓度进行吸附,离心取上清液,用HA试验、荧光RT-PCR和络合滴定法测定。结果选出7000rpm为检测疫苗吸附率的离心转速;当疫苗中氢氧化铝终浓度为0.700mg/mL时,25℃下吸附2h,纳米佐剂与抗原吸附完全,而常规佐剂与抗原吸附不完全。3疫苗质量检测鉴于产品开发要求,对上述工艺生产的禽流感灭活疫苗进行相关检测,其结果均符合国家要求,易储存在4℃低温环境,且纳米氢氧化铝佐剂疫苗比常规氢氧化铝佐剂疫苗更稳定。结论:本研究证实了纳米氢氧化铝是一种良好的免疫佐剂,能够有效地吸附禽流感病毒。并且首次报道了纳米氢氧化铝吸附禽流感H5N1病毒的最佳吸附条件及佐剂浓度,且其吸附率比常规氢氧化铝组高。制备的纳米氢氧化铝疫苗质量可控,为佐剂的改良和研发提供了坚实的理论基础,为佐剂的机理研究提供了理论基础,为进一步的临床试验奠定了牢固的基础。