【摘 要】
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植物油脂合成是植物种子储存物质形成的重要部分。甘蓝型油菜是由白菜和甘蓝通过自然杂交形成的异源四倍体植物。目前对甘蓝型油菜的油脂合成相关基因研究较多,但对这些基因的调控因子的作用尚未进行深入研究。其中包括调控种子油脂合成的关键转录因子FUS3。本研究对甘蓝型油菜BnFUS3的4个同源基因的功能进行了深入研究。BnFUS3同源基因主要在油菜籽发育的中晚期大量表达,但是不同成员的表达模式有所差异。为了更
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植物油脂合成是植物种子储存物质形成的重要部分。甘蓝型油菜是由白菜和甘蓝通过自然杂交形成的异源四倍体植物。目前对甘蓝型油菜的油脂合成相关基因研究较多,但对这些基因的调控因子的作用尚未进行深入研究。其中包括调控种子油脂合成的关键转录因子FUS3。本研究对甘蓝型油菜BnFUS3的4个同源基因的功能进行了深入研究。BnFUS3同源基因主要在油菜籽发育的中晚期大量表达,但是不同成员的表达模式有所差异。为了更好的理解BnFUS3同源基因在油菜籽发育过程中对油脂积累的作用,本研究克隆了甘蓝型油菜中的4个BnFUS3同源基因及其启动子,分别构建了基因与GFP融合表达载体、启动子与GUS融合表达载体以及基因适度表达载体。通过农杆菌介导法将后两个载体质粒转化到甘蓝型油菜“中双11号”中,获得了多个转基因家系,并对其调控油脂的机理及农艺性状进行了研究。已取得了如下成果:1、4个BnFUS3基因均在油菜的胚中高表达,但表达模式有差异,其中,BnFUS3-1和BnFUS3-3在42 d胚中表达量最高,BnFUS3-2和BnFUS3-4在28 d胚中表达量最高。2、成功构建了基因与GFP融合表达载体,并将其转化至烟草叶片中进行了亚细胞定位,其中BnFUS3-1、BnFUS3-3、BnFUS3-4主要定位在细胞核,少量定位在细胞膜,确定BnFUS3作为转录因子在细胞核中发挥功能。3、为了解BnFUS3基因的组织表达部位,成功构建了基因启动子与GUS融合表达载体,转化至油菜中并成功获得了转基因株系,对转基因植株不同组织部位进行GUS染色,表明了BnFUS3主要在种子胚胎表达。4、鉴于BnFUS3在胚胎发育过程中发挥重要作用,常规过表达以及突变均导致种子发育畸形,难以获得萌发正常的种子。本研究利用改进的适度表达启动子构建BnFUS3表达载体,转化至油菜中并成功获得了多个转基因家系。对转基因植株的表型及农艺性状进行分析。BnFUS3-1和BnFUS3-4转基因油菜籽萌发率降低,其中BnFUS3-4转基因油菜籽的蛋白含量降低,含油量升高。
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