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蛹虫草(Cordyceps militaris),又名北冬虫夏草、蛹草菌等,是由子座与菌核两部分组成的复合体。蛹虫草为虫草属的模式种,其分布非常广泛,含有的化学成分与冬虫夏草相似,包括虫草素、虫草多糖、麦角甾醇等,具有较高的经济价值和医疗保健作用,已经为世界各国学者所认识和接受。目前有一些研究报道了蛹虫草的抗肿瘤作用,如蛹虫草粉、水提物或醇提物等,但并没有从开发的角度进行系统的抗肿瘤作用的研究。
考虑到天然冬虫夏草的资源匮乏,蛹虫草的药用价值及作为冬虫夏草的替代品的潜在性,本研究先用全蛹虫草粉经口给药的方式对接种有S180(肉瘤180)、HepA(肝癌腹水)、U14(宫颈癌14)、EAC(艾氏腹水癌)四种动物肿瘤的昆明种小白鼠进行抗肿瘤实验,结果发现蛹虫草粉对EAC实体瘤及HepA实体瘤显示出一定的活性,特别是对肝癌HepA肿瘤生长抑制率接近30%且有统计学意义。
为了进一步提高抗肿瘤作用,获得更好的抗肿瘤效果,本研究采用水回流提取、水超声提取、75%乙醇回流提取、75%乙醇超声提取四种方法提取蛹虫草中的有效成分,提取物用高效液相色谱测有效成分虫草素和腺苷的含量,实验结果说明75%乙醇回流提取获得的虫草素和腺苷的含量最高。同时,用MTT法测四种提取液对Hek293细胞以及四种肿瘤细胞-乳腺癌细胞(MCF-7)、人结肠癌细胞(LoVo)、肝癌细胞(HepG2)、胶质瘤细胞(U251)的体外肿瘤细胞抑制率,结果发现提取物对四种肿瘤细胞均有一定的抑制作用,提取物对乳腺癌细胞的总体抑制率要高于结肠癌细胞、肝癌细胞和胶质瘤细胞,且回流提取物对肿瘤细胞的细胞毒作用最大。
从乙醇的浓度和提取时间对回流提取进行优化,同时对蛹虫草和天然冬虫夏草采用优化后的条件用同一提取方法进行提取,发现提取物的量以及腺苷和虫草素的含量,蛹虫草均高于天然冬虫夏草。体外抗肿瘤实验显示,作用48 h和72 h后,蛹虫草提取物对乳腺癌细胞的抑制率要高于冬虫夏草。
为了进一步了解人工培育的蛹虫草提取物对肿瘤细胞的影响,通过流式细胞仪检测细胞周期,结果表明提取物作用12 h、24 h、36 h、48 h时细胞被阻止在S期,且在提取物作用36 h时检测到细胞凋亡。这为人工培育蛹虫草的市场开发,替代冬虫夏草及蛹虫草的抗肿瘤作用研究奠定了基础。