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背景和目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,近年来随着人们生活和饮食习惯的改变,乳腺癌的发病率逐年上升,严重影响女性的身体健康和生活质量。众所周知,肿瘤的发生发展是多因素、多阶段、多步骤综合作用的结果,涉及信号传导通路、细胞增殖、细胞周期调控、凋亡及血管生成等多方面的异常。因此,乳腺癌发生发展的分子生物学基础是国内外研究的热点。转化生长因子-β(transforming growth factor beta,TGF-β)是一族多功能多肽类生长因子,主要包括TGF-βs家族、激活素(activin)/抑制素(inhibins)家族、骨形态形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族、苗勒抑制物质(Mǖllerian inhibinting substance,MIS)家族等40多个成员。研究较多的是TGF-βs,包括TGF-β1至TGF-β5,它们在调节细胞的生长、分化、凋亡、黏附、胚胎发生和组织修复、炎症反应及纤维化中起着重要的作用。近年来研究发现,TGF-β信号传导通路的异常与肿瘤的发生、发展、转移等密切相关。TGF-β信号传导通路对细胞生长起负性调控作用,传导通路中某些环节异常导致细胞对TGF-β的抑制效应失去敏感性,从而使细胞失控性生长,形成肿瘤。肿瘤细胞可以分泌大量的TGF-β,后者促进血管内皮细胞增生,有利于肿瘤组织血管形成。研究报道,胰腺癌中多见TGF-β1-3,EGF,FGF等多种生长因子的过度表达,而且与肿瘤的分化程度较差和低生存率有关。多数肿瘤如食管癌、乳腺癌等组织中都检测到了TGF-β1高表达,并与肿瘤的临床分期、淋巴结转移等因素密切相关。Smad4是位于人类染色体18q21.1上的抑癌基因,首先由Hahn等于1996年在胰腺癌中发现。约90%的胰腺癌患者的染色体18q区域中存在Smad4杂合性缺失。Smad4是转导TGF-β信号的重要胞浆内信号级联分子,它与活化的受体激活型Smad分子形成复合物,移位到细胞核,与其他转录因子协同作用,调节TGF-β应答基因的转录。Smad4功能失活或表达低下可能影响TGF-β的信号转导并参与肿瘤的形成。血管内皮生长因子(vascular endothelial gronth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子,血管生成在促进肿瘤生长、转移中起着至关重要的作用。VEGF具有增加蛋白水解酶活性,促进间质降解;增加血管的通透性等生物学功能。目前发现的VEGF包括VEGFA、B、C、D、E及胎盘生长因子(PLGF),VEGFC、D除具有诱导血管生成的作用外,还有诱导淋巴管生成的作用。研究证实瘤体内VEGF的表达与肿瘤微血管密度(MVD)直接相关,因此VEGF可以作为一项肿瘤标记物或是作为评价乳腺癌预后的指标。Smad4是TGF-β转导通路中的转录因子,DPC4/Smad4基因失活必然使Smad4蛋白表达异常,从而使TGF-β及Smad4信号转导网络破坏,失去对肿瘤细胞增殖的抑制作用。有关TGF-β/Smad4信号传导通路中TGF-β1、Smad4及VEGF蛋白在乳腺癌中的表达及其在乳腺癌中的相关关系的研究报道较少见,本研究用免疫组织化学Sp法检测乳腺增生症、乳腺癌及癌旁组织中TGF-β1、Smad4及VEGF蛋白的表达,分析其与乳腺癌淋巴结转移的关系以及它们在乳腺癌中的相关关系,旨在探讨其在乳腺癌发生发展中的作用及与乳腺癌转移的关系。材料与方法1.采用免疫组织化学SP法检测35例乳腺癌癌组织、35例乳腺增生症及30例乳腺癌癌旁组织中TGF-β1、Smad4及VEGF蛋白的表达。2.统计学处理:采用SPSS13.0统计软件,率的比较采用χ~2检验。两变量间的相关分析采用Spearmen相关分析。检验水准α=0.05。结果1.TGF-β1蛋白在乳腺癌组织中阳性表达率为82.9%,在乳腺增生症中的阳性表达率为14.3%,在乳腺癌癌旁组织中的阳性表达率为20.0%,乳腺癌组和乳腺增生症组两组之间,乳腺癌组和乳腺癌旁组两组之间TGF-β1蛋白表达均有统计学意义(χ~2=32.941,P＜0.05;χ~2=25.682,P＜0.05)。乳腺增生症组和乳腺癌旁组两组之间TGF-β1蛋白表达无统计学意义(χ~2=0.375,P＞0.05)。TGF-β1蛋白在乳腺癌无淋巴结转移组的阳性表达率为55.6%,在有淋巴结转移组的阳性表达率为92.3%,两组之间比较有统计学意义(P＜0.05)。2.Smad4蛋白在乳腺癌组织中阳性表达率为25.7%,在乳腺增生症中的阳性表达率为88.6%,在乳腺癌癌旁组织中的阳性表达率为80.0%,乳腺癌组和乳腺增生症组两组之间smad4蛋白表达有统计学意义(χ~2=28.233,P＜0.05)。乳腺癌组和乳腺癌旁组两组之间Smad4蛋白表达有统计学意义(χ~2=19.046,P＜0.05)。乳腺增生症组和乳腺癌旁组两组之间Smad4蛋白表达无统计学意义(χ~2=0.912,P＞0.05)。Smad4蛋白在乳腺癌无淋巴结转移组的阳性表达率为33.3%,在有淋巴结转移组的阳性表达率为23.1%,两组之间无统计学意义(P＞0.05)。3.VEGF蛋白在乳腺癌组织中阳性表达率为88.6%,在乳腺增生症中的阳性表达率为54.3%,在乳腺癌癌旁组织中的阳性表达率为53.3%。乳腺癌组和乳腺增生症组两组之间,乳腺癌组和乳腺癌旁组两组之间VEGF蛋白表达均有统计学意义(χ~2=10.08,P＜0.05;χ~2=10.01,P＜0.05)。乳腺增生症组和乳腺癌旁组两组之间VEGF蛋白表达无统计学意义(χ~2=0.006,P＞0.05)。VEGF蛋白在乳腺癌无淋巴结转移组的阳性表达率为66.7%,在有淋巴结转移组的阳性表达率为96.2%,两组之间有统计学意义(P＜0.05)。4.TGF-β1蛋白和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达呈负相关关系(γ=—0.426,P＜0.05)。5.TGF-β1蛋白和VEGF蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关关系(γ=0.559,P＜0.05)。6.Smad4蛋白和VEGF蛋白在乳腺癌组织中的表达呈负相关关系(γ=—0.61,P＜0.05)。结论1.TGF-β1蛋白的高表达与乳腺癌的发生发展和转移有关。2.Smad4蛋白的低表达与乳腺癌的发生发展有关。3.TGF-β1/Smad4信号传导通路的异常在乳腺癌的发生发展中发挥一定的作用。4.VEGF蛋白与乳腺癌的发生发展和转移密切相关,为抗血管内皮因子的靶向治疗提供了实验基础。5.TGF-β1和VEGF在乳腺癌的发展过程中起协同作用,二者共同促进乳腺癌的发生和发展。