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禽白血病是一种广泛存在于肉鸡和蛋鸡养殖业中的一种以引起免疫抑制和肿瘤性疾病为主的传染性疾病[1],以J亚型禽白血病(ALV-J)流行最为广泛,致病力最强[2-3],表现为高带毒率,低发病率和低死亡率[4],多引起生长和免疫抑制[5-8],造成生产性能降低[9-10],给我国养殖业带来了巨大的危害。目前对于禽白血病尚无有效的药物和疫苗[11],主要通过检测淘汰带毒鸡来净化种群,从根源上杜绝该病的传播。公鸡可以通过输精将病毒传染给母鸡,对公鸡进行ALV净化是鸡场净化ALV的关键。传统的检测方法应用最为广泛的有ELISA法、病毒分离法、IFA免疫荧光实验等,各有优缺点。本研究建立了一种RT-PCR(逆转录PCR)的检测方法,采样方便,检测快速,可以有效地对公鸡和母鸡进行ALV检测,阳性检出率相比传统检测法更高,该方法经过实践应用取得了良好的效果。试验一:禽白血病病毒在家禽各组织中的表达定量分析为了了解ALV-J在家禽各组织器官中表达的规律,确定检测ALV的采样材料,试验对3只ALV-J患病鸡进行解剖,提取毛囊、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、空回肠、盲肠、胰脏、泄殖腔上皮组织、输卵管、卵巢、气管等十四个组织器官的RNA,反转录成cDNA,再进行ALV-J的定量检测分析,结果显示,ALV-J在家禽各组织器官均有表达,但表达量存在差异,其中以泄殖腔上皮组织、毛囊、输卵管、卵巢、肾脏等代谢旺盛的部位表达量最高。试验二:RT-PCR检测方法的建立与应用鉴于ALV-J在泄殖腔上皮组织中表达量最高,本试验使用鸡的泄殖腔棉拭子作为ALV-J的检测材料,建立了一种RT-PCR的检测方法(逆转录PCR)法:提取样本稀释液中的RNA,再反转录成cDNA,最后使用ALV-J特异性引物H5、H7进行PCR扩增并进行凝胶电泳,最后对试验结果进行判定。本试验对建立的PCR法进行了退火温度和引物浓度的优化,得出最佳退火温度为58℃,最佳引物浓度为2.4μM。反应灵敏性为3.07×102个拷贝数的病毒。应用试验建立的RT-PCR法对某规模化养鸡场内蛋鸡进行检测,结果显示RT-PCR法阳性检出率明显高于ELISA检测法和病毒分离检测法。试验三:不同品系种公鸡ALV-J感染率检测接下来使用试验建立的RT-PCR检测法对某规模化养殖场饲养条件相同的19个不同品系的种公鸡进行ALV-J检测,共检种公鸡1083只,其中阳性共258只,总阳性率为23.82%,而每个品系的阳性率差异很大,从8.33%-58.33%不等。试验四:分离毒株序列分析为了了解鸡场内流行毒株的遗传信息,分析毒株来源及毒株遗传变异情况,本研究对试验二和试验三养殖场进行了ALV-J毐株的致病区env序列分离,和国内外ALV-J参考毒株进行序列比对分析,构建遗传进化树。结果显示,所分离到的两株ALV-J 株和所有ALV-J参考毒株属于同一个大分支,和A、B、C、D亚群以及内源性E亚群不属于同一分支,表明所分离到的毒株为J亚型ALV而非其他亚型;另外两株分离株同属于一个小分支,具有很高的相似性和非常接近的遗传关系,而两个鸡场为引种和供种的关系,由此推测,引种是传播该病的一个重要因素。试验五:ALV-J感染鸡病理剖检为了了解ALV-J感染引起的临床病理变化,探究分离毒株的致病力和致病特性,试验对8只疑似ALV-J病死鸡进行了病理剖检,观察了其临床病理变化,发现感染了ALV-J的鸡分为有明显症状型和无明显症状型。有明显症状型的鸡表现为鸡冠发白、龙骨弯曲、肝脏肿大、心脏瘀血、脾脏坏死、肝脏肿瘤、盲肠肿大、胰脏肿瘤、肠系膜肿瘤、肌胃腺胃肿瘤、胸腺扁桃体肿大等;无明显症状型的鸡仅表现为肝脏肿大、肾脏肿大、脾脏肿大等,几乎没有其他病理变化,也没有肿瘤的发生。