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布鲁菌病是由布鲁菌引起的一种人畜共患传染病，不仅会引起感染动物的流产、生殖器官炎症、不孕及各种组织的局部病灶，还会造成人类患者的衰弱和各系统炎症，给我国畜牧业和人民生命健康带来极大威胁。由于家畜尤其羊是布鲁菌病的主要传染源，因此羊布鲁菌病的检测和防控就显得尤为关键。但是目前的布鲁菌病检测方法大多存在灵敏度低、耗时费力、不能区分自然感染与疫苗免疫等问题，因此简单方便、灵敏度高、特异性好的检测方法的建立就显得十分必要和迫切。ELISA检测方法具有省时省力、灵敏度高等优点，在许多疾病的检测上已经得到了良好的应用，为该方法在布鲁菌病检测上的应用打下了坚实基础。另外，有研究表明bp26基因高度保守，但是在野生型布鲁菌和布鲁菌疫苗株上却差异表达，因此bp26基因具有作为检测抗原区分自然感染和疫苗免疫的潜质。 本研究以布鲁菌周质蛋白bp26为抗原建立羊布鲁菌病iELISA检测方法，首先，根据GenBank上公布的bp26基因序列设计特异性PCR引物，以猪型布鲁菌S2疫苗株的基因组为模板，PCR扩增出bp26基因。然后将bp26基因连接到pGEX-4T-1载体上，构建pGEX-bp26重组表达载体，并将重组表达载体转化BL21(DE3)感受态细胞，诱导表达并纯化GST-bp26重组蛋白。最后以纯化的重组蛋白为包被抗原，通过筛选最佳抗原包被浓度、最佳一抗稀释倍数、最佳包被时间、最佳封闭液和封闭时间、最佳一抗和二抗孵育时间、最佳显色时间，最终建立iELISA检测方法。研究结果如下: (1)构建了布鲁菌bp26基因的原核表达载体，诱导表达并纯化出了GST-bp26重组蛋白。 (2)利用纯化的重组蛋白建立了羊布鲁菌病iELISA检测方法，反应条件为:抗原包被浓度为3.2μg/mL、最佳一抗稀释倍数为1/10、最佳包被时间为37℃1h、最佳封闭液为5％脱脂奶粉、最佳封闭时间为37℃30 min、最佳一抗孵育时间为37℃1h、最佳二抗孵育时间为37℃1h、最佳显色时间为37℃30 min。 本研究建立的iELISA检测方法具有较好的特异性和敏感性，与虎红平板凝集试验检测结果具有良好的符合性，能够满足羊布鲁菌病临床检测需要，具有较好的临床应用价值。