大黄鱼(Pseudosciana crocea)是我国特有的经济鱼种，以其味道鲜美，营养丰富和极高的药用价值而受到青睐，在大黄鱼人工育苗和网箱养殖等技术相继成熟之后，人工养殖得到迅猛发展。由于养殖规模的不断扩大和养殖环境日益恶化，导致大面积细菌性疾病和病毒性疾病的爆发，给大黄鱼的养殖业造成了巨大的损失。鱼类天然免疫系统反应快、作用广，在抵抗病原体的侵袭中发挥更重要的作用，以至在当前的研究中受到广泛的重视。为了研究大黄鱼在细菌感染过程中免疫相关基因表达样式、相互作用机制以及获得免疫相关基因，我们利用溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(Vibrio parahae molyticus)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)三联灭活疫苗免疫大黄鱼，分别在免疫后6，12，30，36 h取肾脏组织和血液样品，免疫后各个时段血清溶菌活力、抗菌活力和酚氧化酶活力的测定结果表明，免疫后30h大黄鱼的血清抗菌活力最高，提取30h肾脏组织样品的mRNA，反转录成cDNA，通过与pcDNA3.0载体连接，电转化进入大肠杆菌JM109感受态细胞中，得到肾脏组织SMART cDNA文库．菌落PCR鉴定结果显示：插入片段重组率达到97.7％。文库容量达到1.4×10~5个克隆．此SMART cDNA文库的建立为三联灭活疫苗免疫后表达基因的大规模EST(Expressed sequence tag)分析奠定了基础。 蛋白酶体能产生适合于Ⅰ型主要相容性复合体并被提呈到CD8+T细胞的抗原肽。γ干扰素(IFN-γ)诱导产生的PA28-α和PA28-β两个亚基能够组成PA28蛋白酶体并活化蛋白酶体的肽酶活力，PA28蛋白在Ⅰ型抗原呈递中的分子特性和功能在哺乳动物中研究得较为透彻，而在鱼类中还是个空白，大黄鱼PA28-β亚基的研究对了解Ⅰ型抗原加工和呈递机制有很重要的意义。在本研究中，克隆了大黄鱼PA28β基因全长1133个核苷酸的cDNA序列，它编码245个氨基酸的蛋白，分子量为27KD。分别与斑马鱼、比目鱼、猪、鼠、牛和人的同源蛋白有76％，69％，61％，60％，57％和57％的序列同源性。编码的蛋白有很多PA28β特征的保守区，包括PA28β特异的KEKE motif、激活环、C末端区域、脯氨酸富积区和蛋白激酶C识别位点。Western-blot分析表明在肾、肝、脾和小肠中为组成型表达，鳃、心和脑中没有表达，在poly(Ⅰ:C)体内诱导后72 h，在肾、肝、脾、小肠和肌肉中