[目 的]我国女性恶性肿瘤发病谱之首是乳腺癌,在我国乳腺癌的发病率及死亡率呈上现升趋势,也是最常见的女性好发恶性肿瘤之一。中医认为乳腺癌的本质是阳虚不化、阴毒积聚。所以,提倡温阳药物的应用。附子作为临床常用温阳药,被广泛地应用于乳腺癌的中药治疗。但附子治疗乳腺癌的相关分子机制并不明确。为了进一步明确附子与乳腺癌的关系,我们从流行病学和细胞学这两个宏观到微观的层次寻找证据,以期获得更全面的认识。研究附子通过相应的信号转导途径抑制乳腺癌细胞生长的分子机制,将为深入认识附子在乳腺癌治疗中的作用增加理论支持,也有助于附子在临床上的精准应用和发展,为中药在肿瘤治疗中的应用拓展道路、提供依据。[方法]1.附子种植分布与乳腺癌发病之间关系的流行病学调查。2018年初,我们通过医院病案室,系统收集了我校第一附属医院、第二附属医院、第三附属医院(云南省肿瘤医院)2017年首次入院治疗的乳腺癌病人病历,排除了重复病例及省外病例,开展云南省附子种植分布与乳腺癌发病之间关系的流行病学调查研究。2.细胞增殖检测。用浓度梯度为0.05mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL和0.8mg/mL的附子处理细胞;通过MTT分别在2h、4h、6h、12h和24h等不同时间点,检测了乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF10A的增殖情况。3.细胞划痕实验和transwell实验检测附子对乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF10A迁移的影响。4.运用Annexin V-FITC/PI和Hoechst 33342/PI染色来检测附子是否是通过凋亡途径抑制了乳腺癌细胞增殖。实验中,阴性对照为DMSO作用于MDA-MB-231细胞;阳性对照为50μM H2O2处理MDA-MB-231细胞;实验组分别用0.05mg/mL和0.1mg/mL附子处理MDA-MB-231细胞,作用时间都为24h。同样分组检测Caspase3和Caspase9活性。5.分别用0.05mg/mL和0.1mg/mL附子处理MDA-MB-231细胞,运用流式细胞仪和共聚焦显微镜检测细胞内DCFH-DA的荧光强度,以便分析乳腺癌细胞的ROS水平。6.通过real time PCR检测附子对凋亡内源通路和外部通路中涉及到的一系列蛋白表达的影响。以检测附子是否在ROS介导下诱导了乳腺癌细胞的凋亡。[结 果]1.流行病学调查表明附子分布区域乳腺癌发病率明显低于非附子分布区域。2.细胞实验证明附子抑制了乳腺癌细胞的恶性表型但对正常乳腺细胞没有影响。3.附子对乳腺癌细胞的迁移有抑制作用但对正常乳腺细胞没有影响。4.附子能够诱导乳腺癌细胞凋亡,随附子浓度的增加,细胞凋亡率增加。5.适度的附子能够提高乳腺癌细胞的ROS水平,ROS作为第二信使触发了细胞凋亡的内源通路或者外部通路,诱使乳腺癌细胞凋亡,从而发挥治疗乳腺癌的作用。[结论]本课题利用乳腺癌细胞模型检测附子作用后细胞凋亡与氧化还原状态等一系列指标的变化,研究附子抑制乳腺癌细胞生长的分子机制、凋亡通路以及ROS在其中的作用。以期揭示附子通过改变乳腺癌细胞氧化还原状态,诱导乳腺癌细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞恶性表型的分子机制,有助于更全面地认识附子在乳腺癌治疗中发挥的作用,为附子科学合理地应用与优化提供依据,也有助于其应用潜力地发掘,同时为附子有效成分的确定寻找线索。也为“ROS+ROS”策略在中药治疗肿瘤中的开发应用探索道路。