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第一章趋化因子受体CXCR7在人膀胱癌中的表达情况目的研究CXCR7在人膀胱癌中的表达情况并筛选高表达CXCR7的人膀胱癌细胞株进入后续实验方法1.采用免疫组织化学SABC法检测人膀胱癌、癌旁组织以及非癌膀胱组织中CXCR7的表达情况：分析CXCR7表达情况与膀胱癌病理分级、分期的关系；2.采用实时荧光定量PCR检测人膀胱癌5637和T24细胞株中CXCR7-mRNA的表达情况结果1CXCR7在膀胱癌中的表达明显要高于癌旁组织(p<0.05)及非癌膀胱组织(p<0.05),癌旁组织和正常膀胱组织之间CXCR7的表达差异无显著性(p=0.55)；2.膀胱癌组织中CXCR7的表达量与癌细胞病理分级(p=0.011)及病理分期(p<0.05)相关。膀胱癌分化越差、分期越晚,CXCR7的表达量越高；3.CXCR7-mRNA在人膀胱癌5637细胞株中表达高于T24细胞株结论1.CXCR7在膀胱癌组织中高表达,且其表达水平与膀胱癌病理分级、分期呈正相关；2.人膀胱癌5637细胞株中CXCR7高表达,进入后续实验第二章构建以慢病毒为载体的CXCR7-shRNA目的筛选有效CXCR7-siRNA并构建LV-CXCR7-shRNA方法1.设计三条CXCR7-siRNA序列,构建pSilencerTM4.1-CXCR7-shRNA和pcDNA3.1(+)-CXCR7过表达质粒共转染293T细胞后,通过QPCR和western blot筛选干扰效果最佳的CXCR7-siRNA序列；2.以干扰效果最佳的CXCR7-siRNA为基础,采用Invitrogen公司生产的三质粒慢病毒载体系统(包括pAJ-U6--CMV-GFP/PuroR、 pMD2.G和psPAX2)构建LV-CXCR-shRNA,为后续实验做准备结果1.将构建成功的pSilencerTM4.1-CXCR7-shRNA-1、2、3干扰质粒,与pcDNA3.1(+)-CXCR7过表达质粒共转染293T细胞后,细胞中CXCR7-mRNA和蛋白表达明显下调(p<0.05),CXCR7-mRNA表达下调比例分别为93.0%、91.54%和89.06%。2.以CXCR7-siRNA-1为基础构建的LV-CXCR7-shRNA测序结果显示,重组质粒无突变和插入,结果符合预期；3.重组慢病毒质粒大量包装后滴度测定结果为4.2×108,符合后续实验要求结论CXCR7-siRNA-1为干扰效果最好序列,以此序列为基础成功构建LV-CXCR7-shRNA第三章LV-CXCR7-shRNA干扰质粒对人膀胱癌5637细胞生物学行为的影响目的研究LV-CXCR7-shRNA对5637细胞的干扰效果方法将培养好的5367细胞分为三组：实验组转染LV-CXCR7-shRNA质粒；阴性对照组转染LV-shRNA阴性对照质粒；空白组转染空白慢病毒质粒。转染后,1.分别采用QPCR和western blot检测各组细胞中CXCR7-mRNA和蛋白的表达情况；2.MTT实验检测各组细胞的增殖能力；3.Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力结果1.所构建的重组质粒均成功转染至各组5637细胞中；2.经过QPCR及western blot检测,shRNA组(实验组)细胞中的CXCR7-mRNA和相应蛋白的表达量较Con组(阴性对照组)和NC组(空白组)明显下调(p<0.05)；3.MTT实验显示shRNA组细胞增殖能力较Con组和NC组下降(p<0.05);4.Transwell实验显示shRNA组细胞侵袭能力较Con组和NC组下降(p<0.05)结论CXCR7与人膀胱癌5637细胞株的增殖能力和侵袭性相关,通过LV-CXCR7-shRNA下调CXCR7的表达可降低5637细胞的增殖和侵袭能力