抗子宫内膜抗体对人早孕绒毛滋养细胞凋亡及FasL蛋白表达的影响

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenchen19880908
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目的:探讨体外培养人早孕绒毛滋养层细胞在含有抗子宫内膜抗体(EmAb)血清环境中细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及凋亡相关蛋白因子配体(factor associated suicide ligend,FasL)的表达情况。方法:抽取在我院门诊就诊的EmAb阳性而其它与自然流产相关的免疫性抗体阴性的病人肘静脉血5ml用于EmAb(+)血清处理组,同法取5ml各相关免疫性抗体均阴性的正常育龄妇女血清用于EmAb(-)血清处理组。静脉血静置、离心后取上清-80℃保存备用,作为实验干预条件。无菌条件下获取正常妊娠6~8周早孕绒毛组织,经胰蛋白酶/DNA酶Ⅰ联合消化,Percoll密度梯度离心法对得到的细胞进行纯化并培养,将最终获得的CTs应用免疫细胞化学法对其进行纯度鉴定,并同时传代培养。将传1-2代的CTs分为2组:EmAb(+)血清处理组和EmAb(-)血清处理组,分别加入EmAb(+)血清处理和EmAb(-)血清处理并培养,于0h、48h、72h、96h,分别经过台盼蓝排出试验观察CTs的活力、计算细胞存活率;采用DNA末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(lebeling of DNA strandbreak- TUNEL)测定两组绒毛滋养细胞于培养0h、48h、72h、96h时刻的细胞凋亡指数,同时采用免疫细胞化学法测定FasL蛋白的表达情况。结果:EmAb(+)血清处理组于培养72h、96h时间点测得AI明显高于EmAb(-)血清处理组(P<0.01);FasL蛋白表达明显低于EmAb(-)血清处理组;而培养48h时AI及FasL蛋白表达在两组之间无显著性差异。结论:绒毛滋养细胞在EmAb(+)环境下培养达到一定时间后其细胞凋亡指数增加,FasL蛋白表达减少。意义:CTs中AI、FasL蛋白在不同干预条件下的反应有助于进一步理解自然流产的发病机制。EmAb(+)血清处理组绒毛滋养细胞AI明显高于EmAb(-)血清处理组,提示我们可以从细胞凋亡入手探讨EmAb在自然流产中所发挥的作用。绒毛滋养细胞在加入EmAb(+)血清培养72h.96h后,FasL的表达明显低于EmAb(-)血清处理组,说明EmAb抑制FasL蛋白的表达。但经过纯化培养的滋养细胞中大部分淋巴细胞被清除,由此可以认为本实验中的绒毛细胞凋亡与FasL的表达减少应该没有关系。但是在体内环境下,EmAb(+)的RSA患者的绒毛细胞FasL表达减少可能会使母血和蜕膜组织中的Fas+杀伤性淋巴细胞凋亡减少,Fas+杀伤性淋巴细胞数目相对增多,使得胎盘部位滋养细胞凋亡增多,从而导致或促进自然流产的发生。
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