目的：　　探讨小鼠横纹肌肉瘤DWI的ADC值，IVIM的D值、D*值、f值与其免疫组化指标Ki-67表达水平的相关性。　　材料与方法：　　一、实验材料　　（一）实验动物及细胞　　27只雌性Balb/c nu/nu裸鼠，胚胎型横纹肌肉瘤细胞RD。　　（二）实验试剂　　DMEM培养基，胎牛血清，Ki-67抗体。　　（三）实验设备　　1.细胞处理设备：超净工作台、高速离心机、细胞培养箱。　　2.MRI设备：美国GE Discovery750W3.0T MRI扫描仪、四通道腕关节相控阵射频线圈。　　二、实验方法　　（一）建立小鼠横纹肌肉瘤模型　　1.横纹肌肉瘤细胞培养　　细胞培养在含10％胎牛血清DMEM完全培养基中，37℃，5％CO2且湿度饱和的无菌培养箱中进行培养。　　2.裸鼠接种　　每只裸鼠注射1*107个/ml的细胞悬液0.15ml于右侧背部。　　3.裸鼠饲养　　裸鼠饲养在大连医科大学大学模式动物研究所IVC系统内　　4.裸鼠成瘤及生长情况观察　　接种完后每2-4天观察肿瘤生长情况及裸鼠精神状况，计算每只裸鼠的肿瘤体积(V=0.5*ab2)　　5.成瘤标准　　小鼠接种部位可触质韧肿物，体表测得其体积大于1000mm3，且MRI T1WI、T2WI均可见皮下软组织肿物，病理切片镜下观察符合横纹肌肉瘤的诊断标准。　　（二）横纹肌肉瘤荷瘤鼠MRI检查技术、MRI图像处理及观察方法　　1.横纹肌肉瘤荷瘤鼠MRI检查技术　　采集横纹肌肉瘤荷瘤鼠FSE-T1WI、FSE-T2WI、EPI-DWI、EPI-IVIM图像，扫描完成后将所有图像上传至ADW4.7工作站。　　2.横纹肌肉瘤荷瘤鼠MRI图像处理及观察方法　　在DWI及IVIM图上选取信号最高处为ROI，对每幅ADC伪彩图、D值图、D*值图及f值图重复测量三次取平均值。　　（三）小鼠横纹肌肉瘤MRI-病理对照方法　　采用本课题组前期软组织模拟肿物MRI-病理精准对照方法的实验研究，主要步骤如下。　　1.横纹肌肉瘤荷瘤鼠扫描前准备　　10％水合氯醛以0.05/10g进行腹腔注射麻醉，之后进行荷瘤鼠体表定位标记。　　2.横纹肌肉瘤荷瘤鼠MRI检查　　该实验环节主要是采集横纹肌肉瘤荷瘤鼠T1WI、T2WI、DWI、IVIM图像。　　3.横纹肌肉瘤荷瘤鼠MRI层面-病理切面对照方法　　(1)沿小鼠长轴，切开肿瘤表面的皮肤　　(2)术中暴露肿瘤后，与A线重叠，在肿物暴露面中央系一手术标记线B　　(3)与A线重叠，在肿物暴露面左侧系一手术标记线，为C;　　(4)与A线重叠，在肿物暴露面右侧系一手术标记线，为D;　　(5)在B线头侧正上方的肿物暴露面边缘，系一手术标记线E用病理取材刀沿B、C、D三线的位置切开，得到取材面。　　4.影像面ROI与病理取材点对照方法　　将图像面，根据肿瘤实际大小1∶1纸质打印，完整裁出感兴趣区(ROI)形成透亮区，将含透亮区的打印纸与病理取材面B吻合，空白区即为病理观察区。　　（四）HE切片制作及免疫组化切片制作技术　　1.HE切片制作：对组织块进行梯度酒精脱水，浸入石蜡3小时。浸蜡后的组织块进行石蜡包埋和4mm切片，烘烤后备用。烘烤后的切片依次进行苏木精及伊红染色，最后中性树胶封片。　　2.KI67免疫组化切片制作：烘烤前的步骤同HE切片制作，烘烤后的切片置入二甲苯及梯度酒精中进行脱蜡和复水。完毕后进行100度高温进行抗原修复。最后进行抗原抗体的反应和中性树胶封片。　　（五）、HE切片及免疫组化观察方法　　HE切片及KI67免疫组化表达情况由两名病理科医师独立在镜下观察观察。　　三、观察指标　　（一）横纹肌肉瘤荷瘤鼠成瘤及肿瘤生长情况;　　（二）小鼠横纹肌肉瘤的常规MRI表现：肿瘤位置、形态、大小、边界、信号、有无包膜、有无分叶、瘤内分隔;　　（三）DWI、IVIM双指数模型下运算所得各项指标：①表观弥散系数(ADC)值、②单纯扩散系数(D)值、③假性扩散系数（D*）值、④灌注分数(f)值;　　（四）组织病理学特征：组织结构、细胞形态、细胞异型性、坏死等;　　（五）Ki-67表达：计数i000个肿瘤细胞，计算阳性染色肿瘤细胞的百分比。　　四、统计学方法　　采用SPSS24.0统计学软件(version24.0，SPSS Inc，Chicago)进行统计分析，对表观弥散系数(ADC)值、单纯扩散系数(D)值、假性扩散系数（腑）值、灌注分数(f)值分别与Ki-67百分比进行person相关检验;若有一者不服从，则进行spearman相关性检验。　　结果：　　一、小鼠横纹肌肉瘤模型建立结果　　每例裸鼠接种完成后均可触及皮丘形成，质软。27例肿瘤形成的时间为7.9±3.9天。　　二、横纹肌肉瘤荷瘤鼠的MRI表现　　1.T1WI、T2WI表现：27例肿瘤位于小鼠右侧背部皮下，与肌肉信号相比，T1WI显示肿瘤为均匀等信号或等稍高信号，T2WI显示肿瘤为高信号。　　2.DWI、IVIM表现：27例肿瘤DWI呈不均匀高信号，IVIM均呈高信号。三、横纹肌肉瘤荷瘤鼠ADC、D、D*及f值　　对27例横纹肌肉瘤荷瘤鼠MRI图像进行后处理，在其ROI处测得ADC、D、D*及f值，平均ADC值为1.0470±0.2036×10-3mm2/s;平均D值为0.7237±0.0971×10-3mm2/s;平均D*值为4.8497±1.6293×10-3mm2/s、f值为0.1020-0.2290。　　四、横纹肌肉瘤荷瘤鼠常规病理学表现　　27例镜下可见横纹肌肉瘤细胞呈小圆形，细胞核深染，胞浆不明显有异型性，核分裂多见。　　五、横纹肌肉瘤荷瘤鼠Ki-67表达结果　　对27例横纹肌肉瘤荷瘤鼠的Ki-67切片上取材点进行观察，其平均Ki-67表达为84.6±4.8％。　　六、小鼠横纹肌肉瘤DWI、IVIM与其Ki-67相关性　　对27例小鼠横纹肌肉瘤的DWI及IVIM参数与其Ki-67进行Pearson相关性检验，其结果表明27例小鼠横纹肌肉瘤的ADC值与其Ki-67呈中度负相关，且差异有显著性(P＜0.05);D值与Ki-67呈中度负相关，差异有显著性(P＜0.05);f值与Ki-67呈弱负相关，差异无显著性(P＞0.05);D*与Ki-67相关无显著性。　　结论：　　通过本次研究我们可以得出如下结论：　　一、采用胚胎型横纹肌肉瘤细胞系种植于裸鼠背部皮下，建立的小鼠横纹肌肉瘤模型成瘤率高、可重复强，可用于开展软组织肿瘤影像-病理对照的实验研究。　　二、采用体征线-影像面-取材面三步控制法在小鼠横纹肌肉瘤MRI影像面-病理取材面、感兴趣区-病理取材点对照的基础上，小鼠横纹肌肉瘤MR功能影像DWI ADC值、IVIM D值与其病理免疫组化指标Ki-67表达有相关性，且呈负相关，即当ADC值、D值越高，其Ki-67表达越低，反之则越高;小鼠横纹肌肉瘤MR功能影像IVIM的D*、f值与Ki-67表达无相关性。