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本文对比了两种引物T7和159对藻核酸和噬藻体PP的核酸的扩增效率,发现引物159可以特异性扩增出噬藻体PP的核酸,通过克隆测序,优化设计了引物159B,该引物可以高效地扩增出噬藻体PP的核酸。进一步,利用引物159B对若干季节的武汉东湖不同湖区的 PP 类噬藻体进行PCR 扩增和 PCR 产物直接测序,通过序列比较,发现PP类噬藻体PCR扩增序列的差异不大(平均差异为2.93%,最大差异不超过8%),因此推测环境中PP类噬藻体的遗传多样性较为稳定。
本文还使用RAPD 法研究了环境水样的PP类噬藻体的遗传多样性,结果发现,不同时空来源的PP类噬藻体的MPD电泳图谱高度相似,也说明东湖的PP类噬藻体遗传差异不大。
为了进一步研究噬藻体PP分子生物学的性质,我们还尝试了对噬藻体PP的全基因组进行测序。测序最后得到了159个不能拼接的片段,将这些片段分别与NCBI 中的病毒库和原核生物库进行了比对,其平均相似值分别是26.13%和49.03%,这一结果说明测序时可能发生有宿主和细菌DNA污染。同时,我们也发现,尽管噬藻体PP的第132、102、78和17号序列无法拼接成一个序列,但它们均与噬藻体 Pf-WMP4 的第 40 号开放阅读框相似,且相似区域是重叠的。类似的情况还出现在了第93和78号序列上(对应的是Pf-WMP4的第37号开放阅读框),及第143和5号序列上(对应的是Pf-WMP4的第36号开放阅读框),噬藻体PP第81 号序列与噬藻体Ma-LMM01 的序列片段也有68%的相似性。这至少说明部分测序结果是未受污染的。