猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)属于圆环病毒科、圆环病毒属，是一种单链、环状的DNA病毒，包含致病性的Ⅱ型猪圆环病毒(PCV2)和无致病性的Ⅰ型猪圆环病毒(PCV1)。PCV2引发的断奶仔猪多系统综合征目前已经成为养猪业中非常普遍的一种传染性疾病，给养猪业造成了极大的经济损失。到目前为止，已经证明PCV至少含有ORF1、ORF2、ORF3和ORF4四个编码阅读框编码病毒蛋白。ORF3蛋白被认为与致病性和细胞凋亡相关。本研究尝试分析其抗原表位与细胞生物学特性。　　以抽提的PCV2基因组DNA为模板，利用PCR法扩增PCV2的ORF3全长基因，然后克隆到pET-28a(+)原核表达载体上。将测序正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株，IPTG诱导表达，ORF3能以包涵体形式被表达，表达的融合蛋白采用Ni-NTA镍柱可纯化出较高纯度的His-ORF3蛋白。以纯化的His-ORF3蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞进行融合。经过HAT和HT选择培养基、ELISA和间接免疫荧光抗体实验筛选后，获得3株能稳定分泌ORF3抗体的细胞株3C3、4D5、5F17。结果显示，三株单抗均能识别PCV2感染细胞内的ORF3蛋白，而与ORF3缺失的PCV2感染细胞没有反应。　　采用合成ORF3线性多肽和构建ORF3截短体转染细胞进行单克隆抗体的识别表位鉴定，结果显示，ORF3特异性线性表位83GTHSSRQVTPLSL95能被单克隆抗体3B1、1H3、3D12识别，不被单克隆抗体3C3、4D5、5F17识别。单克隆抗体3C3、4D5、5F17不识别ORF3的线性表位。　　利用单克隆抗体3C3观察不同感染时间下分析ORF3蛋白的亚细胞定位变化，结果显示，ORF3蛋白在胞浆内合成后被运输到细胞核。利用构建的pEGFP-ORF3截短体和pEGFP-GST-ORF3截短体转染细胞观察ORF3蛋白的定位，否定了之前预测ORF3蛋白存在2个核定位信号序列53FQKFSQPAEISDKRYR68和85HSSRQVTPLSLRSRSSTLHQ104，并且找到了ORF3蛋白的核输出信号序列(NES)位于N-1-35aa。