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目的 在原核中表达及鉴定重组HLA-A~*0201基因胞外区片段蛋白分子，并制备其特异性多克隆抗体，为进一步研究HLA-A~*0201基因与肺癌及其生物治疗的关系奠定基础。方法 通过PCR方法自重组质粒pcDNA3.1-HLA-A~*0201中获取目的基因，与原核非融合表达载体pBv220连接，重组载体转化大肠杆菌，通过氨苄青霉素筛选获得阳性克隆、小提质粒后，酶切鉴定，并测序确定。阳性克隆诱导表达，SDS-PAGE电泳测其表达，并进行Westernblot分析验证表达产物。通过离子交换柱和分子筛柱两步纯化获取目的蛋白。将获取蛋白免疫小鼠得到抗HLA-A~*0201多克隆抗体，ELISA测定抗体效价。结果 成功克隆HLA-A~*0201基因胞外区片段，测序结果与已知序列完全一致。目的基因于原核系统中高效表达，表达产物以包涵体形式存在，并以商品化抗体进行Western blot分析证实为HLA-A~*0201蛋白。纯化后得到高纯度的HLA-A~*0201基因胞外区片段表达蛋白，免疫小鼠后得到其多克隆抗体，ELISA测定抗体效价为1：10000。 结论 证明克隆获得的HLA-A~*0201基因胞外区片段可在原核系统中高效表达，并通过基因工程方法制备抗HLA-A~*0201特异性抗体，为HLA-A~*0201基因的深入研究提供了基础。