大鼠KCTD10基因的克隆及功能研究

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  肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一个多功能的细胞因子,在许多细胞生理过程中起重要作用,比如细胞凋亡、细胞增殖、B细胞激活、肝细胞的再生以及一些急性的细胞炎症反应等。人类的PDIP1(polymerasedelta-interactingprotein1)是一种受TNF-α和白介素6(IL-6)诱导的蛋白,并且能与增殖细胞核抗原(PCNA)和DNA聚合酶δ的小亚基有相互作用。PDIP1家族的另一个成员TNFAIP1蛋白(又称为B12基因),能够受TNF-α诱导,并且能与PCNA、P50相互作用。在大鼠中,也证实了PDIP1和TNFAIP1基因的存在并且已被克隆。本文用大鼠的PDIP1基因在GeneBank中搜寻到了一组与PDIP1有较大的序列相似性的EST,并且通过RACE扩增出了其cDNA全长,命名为KCTD10(PotassiumChannelTetramerisationDomain-containing10)。大鼠KCTD10与PDIP1及TNFAIP1在氨基酸序列上高度保守,在N端区域,都有一个BTB/POZ的结构域;而在C端区域,则是PCNA的结合基序(QTKV-EFP)。根据PDIP1和TNFAIP1能够与PCNA和P50相互作用,本文用免疫共沉淀等方法确定了大鼠KCTD10与PCNA以及P50之间也有相互作用。同样,因为TNF-α能够诱导PDIP1和TNFAIP1基因的表达,本文通过TNF-α诱导NIH3T3细胞从而使KCTD10基因的表达水平升高,从而得出KCTD10同样能够被TNF-α诱导的结论,因而从功能上证明了KCTD10与PDIP1、TNFAIP1之间的同源性。NorthernBlot和实时定量PCR显示KCTD10主要在肺里面表达,其次是心脏和睾丸。本文的研究为进一步研究PDIP1家族的功能提供了基础。
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