肝脏移植(liver transplantation,LTx)已经成为治疗各种终末期肝脏疾病的有效方法，但供体器官的缺乏却成为制约临床肝移植发展的重要因素。利用脑死亡供体(brain-deaddonor,BDD)是有效缓解器官来源缺乏的主要途径之一。脑死亡(Brain death)是包括脑干在内的全脑功能丧失后的不可逆转的病理状态，即死亡。脑死亡状态下的肝脏会发生形态和功能上的损伤性变化，这些损伤可能在缺血再灌注时加重。因此，研究脑死亡供体的供肝损伤的机制以及如何对肝脏进行保护，对于有效利用脑死亡者供肝进行肝移植具有重要意义。有关脑死亡供体供肝的损伤机制尚未完全阐明，对脑死亡供体供肝进行保护的研究尚未见文献报道。 目的 本课题拟使用大白鼠脑死亡模型和原位肝移植模型，探讨脑死亡大鼠供肝的损伤机制，以及甘氨酸对肝脏损伤的防护作用等，为临床利用脑死亡供体进行肝移植提供理论依据。 方法 健康Wistar雄性大鼠56只，随机分为4组，即活体大鼠供肝肝移植组(L)、脑死亡大鼠供肝肝移植组(B)、甘氨酸预处理的脑死亡大鼠供肝肝移植组(G)和甘氨酸与士的宁预处理的脑死亡大鼠供肝肝移植组(S)。L组仅建立活体大鼠供肝的二袖套法原位肝移植模型；B、G、S组均建立脑死亡大鼠供肝的肝移植模型，即供体建立脑死亡模型后切取供肝行二袖套法原位肝移植。判定大鼠脑死亡状态标准是：①深昏迷；②脑干反射消失；③自主呼吸停止；④静息脑电图。B、G、S组供体大鼠在建立脑死亡状态动物模型后，经肝下下腔静脉向供体大鼠注射乳酸林格氏液2ml，其中G组含300mmol/l甘氨酸；然后在郑州大学2003届硕士研究生毕业论文甘氨酸对大鼠脑死亡移植肝防护作用的实验研究刁护困盯尹.，J爪今获“哪J尸习尸刁砚‘，的叭.尸‘叭训r曰晚‘此J尸‘砚口困哪汤侧油盯诩哪知召‘仍J峨虎r‘护尸J户曰夕尸J尸口，J夕甘，r丫团户护欲侧叼日眨日rj民诵口.尸洲r曰砰滋叱碑奋‘悦J护r油，‘砚切户洲刁尸，尸日晚日口解月r司尸解训口困.翎rjrJ尸Jr习口j尸.甲滚护供体大鼠肝脏切取前的门静脉冷灌注时，以及受体大鼠移植后的门静脉血流恢复再灌注时，分别经门静脉给予sml乳酸林格氏液，其中B组含5~。班的甘氨酸，S组含5~叨1的甘氨酸和sum。价士的宁。分别在供体门静脉冷灌注前、受体门静脉血流复流后2小时和6小时经肝下下腔静脉取血，测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、透明质酸(HA)肿瘤坏死因子a(TN下一Q)的水平，透射电镜检测门脉复流后6小时肝脏形态变化，TUNEL法检测肝脏细胞凋亡情况。统计学分析:实验数据采用单因素方差分析和配对设计t检验，使用SPSSIO.O统计软件包处理，a二0.05为检验水准。结果 1.4个实验组供肝切取时间、供肝冷缺血时间、受体无肝期和受体手术时间等差异无统计学意义，尸>0.05。 2.B、G、S组供体平均动脉压和心率等在颅内加压前、加压时和脑死亡状态时组间差异无统计学意义，尸>0 .05。 3.在供肝冷灌注前、门脉复流后2h和6h等对应时间点，B组和L组比较，ALT、AST、TN下一a、HA和Al等均显著性升高，P<0.05;G组与B组比较，以及G组与S组比较，A工T、AST、TNF一。、HA和AI等均显著性降低，P<0.05;B组与S组ALT、AST、TN下一。、HA和Al等组间差异无统计学意义，尸>0.05。 4.各组门脉复流后6h的A工T、AST、HA等水平较门脉复流后Zh均显著性升高，尸<0.05，TN下一a水平Zh达峰值，6h略有下降，尸<0.05。 5.与L、G组比较，B、S组门脉复流后6h形态学变化显著。电镜观察到KuPffer细胞明显活化，粗面内质网扩张，胞浆内有初级或次级溶酶体:肝细胞等肿胀甚至空泡变性，内质网扩张呈池状，线粒体高度水肿，靖部分断裂、有的全部消失，核染色体边集、部分呈半月形。细胞凋亡现象明显，TUNEL法处理肝脏凋亡细胞细胞核染成黄褐色，非凋亡细胞的胞核染成蓝紫色。G组较B和S组肝细胞损伤较轻、KuPffer细胞活化不显著。结论 1.脑死亡状态可以引起脑死亡大鼠肝脏损伤性变化。大鼠脑死亡状态下血流动力学的 改变和K印ffer细胞的激活可能是造成脑死亡大鼠供肝损伤的主要原因。郑州大学2003届硕士研究生毕业论文甘氨酸对大鼠脑死亡移植肝防护作用的实验研究护尸矛‘了矛‘矛困护尸州时曰甲加少.尸识，rrjr汤尸.尸了尸了护了爪‘广少润r尸价j卜J.护尸Z了窟刃洲沪侧了月，尸，J户护尸口产沪‘尹~r护曰口尸了.尸夕月尸困尸‘r了贾、了了r矛.护曲，了日r日尸、矛，‘护洲尸户福~了司护了了 2.甘氨酸能明显减轻脑死亡状态下大鼠肝脏的损伤，并对脑死亡大鼠供肝移植过程中的冷保存再灌注损伤有防护作用;这些作用可以被KuPfl笼r细胞上甘氨酸受体拮抗剂士的宁所拮抗，提示甘氨酸的作用机制是通过特异性阻抑KuPffer细胞的活化来实现的。