白桦雄花序发育差异表达基因分析及Rab基因植物表达载体构建

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白桦雄花发育周期较长,从出现雄花序至花粉成熟经历近一年,其发育早期和中期是决定雄配子体发育的重要时期。本文采用cDNA-AFLP方法对早期和中期发育雄花序进行了差异表达谱分析,共得到了62个TDFs,其中30个TDFs与Genbank中的基因具有较高的同源性,其它32个是未知序列。GO分析结果显示,这些已知基因主要参与代谢过程、细胞过程、刺激应答、生殖、信号传导和生物调控等生物学过程,其分子功能主要涉及催化活性、结合分子功能、酶调节活性和转运活性等。我们也发现了参与生殖和雄花发育的两个重要TDFs, Bplbs658和Bplbsl99。另外,我们选择11个TDFs进行不同组织的qRT-PCR转录表达分析,结果表明这些基因不仅参与花发育,也参与营养组织的发育,但各自具有不同的组织表达特征。此外,我们又通过RT-PCR分离了白桦Rab基因得cDNA,通过RACE技术扩增到其全长序列,该序列全长1017bp,全长序列的开放阅读框长度为612bp,共编码203个氨基酸,命名为BplRab。将全长序列翻译成为氨基酸序列,对Rab基因的蛋白结构做了预测,进行了多序列比对,发现该基因的氨基酸序列和其它种植物的氨基酸序列相似性高达90%以上。结构域分析发现Rab蛋白具有Rab家族的保守的G结构域,然后预测了Rab蛋白的三维结构。最后构建了植物表达载体pROKⅡ-Rab,为以后研究白桦Rab基因功能、农杆菌介导的遗传转化及侵染拟南芥和白桦植株奠定了良好的基础。
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