本试验依据国家标准(GB/T 4789.30-2008)从市售肉、蛋、乳制品及部分水产品中共分离鉴定了38株产单核细胞李氏杆菌。多重PCR将此38株分离株的血清型分为3类,其中34株为1/2a & 3a,3株为1/2c & 3c,1株为1/2b、3b & 7。38株分离菌对30种抗生素中的大多数抗生素敏感。13株在comK基因位点携带有原噬菌体,16株在tRNAArg基因位点携带有原噬菌体,丝裂霉素C诱导及透射电镜观察证实获得了一株溶源性噬菌体。12株分离株的溶血试验结果显示均具有较强的溶血活性。选取以上实验得到的HA1069,该菌株溶血能力较强、对各种常用抗生素敏感且不含有原噬菌体,测定其prfA基因群核苷酸序列,在此基础上设计引物,SOE-PCR扩增同源重组交换臂,并克隆至大肠杆菌-李氏杆菌温敏型穿梭质粒pKSV7,得actAlplcB双缺失同源重组质粒pK1013；以电转化方式将质粒pK1013导入菌株HA1069感受态细胞,经抗生素抗性和温度敏感筛选后,PCR检测确认获得一株actAlplcB双缺失突变株。以结核分枝杆菌嵌合抗原856A2为外源基因,通过基因切割、SOE-PCR等将编码856A2蛋白的基因片段与hly基因的启动子连接,定向克隆到pKSV7载体上,并电转化至actAlplcB双缺失突变株感受态细胞,PCR检测结果表明重组质粒转化成功。Western-blot显示作为阳性对照的大肠杆菌表达856A2有清晰条带,而重组李氏杆菌培养上清未显示有条带,可能是由于李氏杆菌胞外表达蛋白产量很少而不足以检测。