本文分两部分,第一部分将磺胺二甲嘧啶（SM₂,Sulfamethazine）与牛血清白蛋白（BSA）、人血清白蛋白（HSA）利用优化的重氮化法进行偶联,分别作为免疫原及包被原,免疫原注射免疫新西兰大白兔获得多抗血清。第二部分建立了快速检测水产品中残留磺胺二甲嘧啶的间接竞争ELISA方法,并通过对比实验,对检测过程中的各项条件进行优化。 研究方法和结果如下:用重氮化法将SM₂与载体蛋白BSA偶联制备人工合成抗原SM₂—BSA,以此作为免疫原,同法合成包被抗原SM₂—HSA。选择常规免疫程序,免疫2～3月龄新西兰大白兔,获得多抗SM₂抗血清,结果表明抗血清特异性针对SM₂。用间接ELISA法测定抗血清效价,同时,利用ELISA方法对抗血清进行性质鉴定,分别以HSA、SM₂—HSA、BSA及SM₂—BSA进行包被,结果表明抗血清中存在抗SM₂抗体,所获得的抗血清基本符合实验要求。 用所制备的抗血清建立了间接竞争ELISA检测SM₂方法。利用对比实验,优化ELISA工作条件,方阵滴定法确定理想SM₂—HSA包被抗原的浓度为1.0μg/ml,酶标二抗（羊抗兔IgG—HRP）工作浓度为1:1000以及多抗（SM₂—PcAb）血清的工作浓度为1:3200。以上述实验条件为基础,以系列稀释的SM₂标准溶液作为检测对象,绘制标准曲线,拟和的线性回归直线方程为y=88.323—18.013x,相关系数R²=0.9964,从标准曲线可以得知,此方法可测定的最适范围为10～200μg/L,最小检测限约为1.89μg/L。本实验所建立的ELISA方法的精确度以批内误差（孔间差异）和批间误差（板间差异）表示,结果表明孔间差异和板间平均差异分别为2.56%和5.14%,这表明方法精确度较好。添加回收率实验测得凡纳滨对虾肌肉样本和牙鲆肌肉均回收率为90.98%±3.32%和90.02%±2.68%在可测定浓度范围内,磺胺二甲嘧啶（SM₂）抗血清与磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazole）、氯霉素（chloramphenicol）、红霉素（Erythromycin）、恩诺沙星（Enrofloxacin）、甲氧苄啶（Trimethoprim）、呋喃唑酮（Furazolidone）等可能会因同时使用而导致共同残留的抗微生物药物未显示