抑制副猪嗜血杆菌中药的筛选及其预防作用研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:salih0997
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近年来,副猪嗜血杆菌(Haemophi Lus parasuis,HPS)所引起的全身性炎性疾病给全球养猪业造成巨大的经济损失,如何预防和控制HPS病发生成为国内外关注的焦点,因此,疫苗的研究开发也受到了重视。目前开发出的疫苗有灭活苗、亚单位疫苗、DNA疫苗和基因工程疫苗等。近年来,中药在抗菌方面的应用越来越普遍,由此启发了我们用中药来防治HPS病。本研究主要筛选既能有效抑制HPS的生长,又能提高动物机体免疫力的中药,从而为HPS病的防控及养猪行业发展提供有效数据和科学依据,具有重要的现实意义及应用价值。实验一:通过大量国内外文献选取有价值的抗菌中药,再通过体外药敏实验,借助于琼脂扩散法、生长抑制试验等方法筛选出有效的抑菌药物,同时研究探讨了筛选出的三种中药对13型HPS的抑制效果;通过倍比稀释的方法计算出菌浓度与OD600的关系曲线,为后续攻毒提供了基础数据。实验二:将昆明雌性小鼠随机分为7组,分别为空白组、阴性对照组、阳性对照组、中药1组、中药2组、中药3组及混合中药组。采取隔天灌胃的方法,14d后以13型HPS攻毒,采取小鼠外周血液检测T淋巴细胞亚群和T淋巴细胞转化率,ELISA方法检测血清中IL-2含量,利用QRT-PCR法检测细胞因子变化。结果显示:(1)通过TSA固体培养基的培养,中药1、中药2对13型HPS有明显的抑制效果,抑菌环直径分别为28.5mm和13.5mm,生长抑制试验发现三种中药对HPS均具有抑制作用;(2)T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比值显示,阳性组极显著低于空白及阴性组(P<0.01),说明HPS抑制了小鼠的细胞免疫水平,提前灌喂中药2和中药3后,则极显著或显著高于阳性组(P<0.01、P<0.05),说明两种中药均能有效增强机体细胞免疫,减轻13型HPS所带来的危害;(3)免疫保护试验发现阳性组小鼠的IL-1β和IL-6含量高于空白及阴性组(P<0.01),3种中药对IL-2均没有影响,但单独使用时均能显著或极显著降低肝脏IL-1β及IL-6的含量(P<0.05或P<0.01);四个中药组较阳性对照组肺脏IL-6含量均极显著降低(P<0.01),中药2组肺脏IL-1β含量极显著降低(P<0.01),故说明三种中药均能刺激机体产生抵抗炎症的作用,从而抑制炎性因子IL-1β、IL-6的产生。(4)中药1对13型HPS攻毒小鼠的保护率为50%,而中药3的保护率为33.3%,说明中药1和中药3对13型HPS的攻击都具有不同程度的保护力。本研究显示中药通过细胞免疫起到预防HPS感染致病作用,为防控HPS病提供新的方向和依据。
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