【摘 要】
：
通过PCR分别改造已获得的H1亚型HA1和H3亚型HA基因片段，在融合片段间引入(G4s)3柔性linker和口蹄疫2A蛋白linker。采用NAstar结合生物信息学软件InsightⅡ分析后对其空间构象进行模拟和评价。将融合表达H1HA1和H3HA的基因片段克隆至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游。通过脂质体法转染HeLa细胞，进行RT-PCR与间接免疫荧光检测。结果表明，成功构建了表达
【机 构】
：
吉林大学畜牧兽医学院 长春 130062 军事医学科学院军事兽医研究所 长春 13006
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
论文部分内容阅读
通过PCR分别改造已获得的H1亚型HA1和H3亚型HA基因片段，在融合片段间引入(G4s)3柔性linker和口蹄疫2A蛋白linker。采用NAstar结合生物信息学软件InsightⅡ分析后对其空间构象进行模拟和评价。将融合表达H1HA1和H3HA的基因片段克隆至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游。通过脂质体法转染HeLa细胞，进行RT-PCR与间接免疫荧光检测。结果表明，成功构建了表达双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素真核表达载体pVAX1-H3HA-H1HA1，RT-RCR表明重组质粒在转染HeLa细胞后出现了目的基因的转录，IFA证实目的基因在HeLa细胞上可有效表达。真核表达质粒pVAX1-H3HA-H1HA1可以在HeLa细胞中正确转录与表达，为抗H3、H1亚型流感病毒双价核酸疫苗的研究奠定了基础。
其他文献
猪传染性胸膜肺炎(PIPS)是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种猪高度接触性呼吸道传染病，是猪急性呼吸道疾病发生的重要原因。本文以探讨APP两种在体内表达的蛋白ApxIVA(胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素IVA)和TbpB(运铁蛋白结合蛋白B)对灭活疫苗免疫效果的影响为目的。研究从分析基因序列特性开始，采用PCR方法成功扩增APP血清1型apcIVA基因5端两个特征性氨基酸序列(N端疏水性区域和中
采用ELISA和凝集试验方法对2004-2007年259个规模猪场的9640份血清样本进行PRDC相关病原感染的血清学调查。结果表明，PRRSV、PCV-2、PRV、SIV(H1N1)、M.H、APP、HPS、PAR、Tpl感染抗体总体阳性率分别为38.29％、50.86％、25.78％、39.20％、29.63％、30.00％、27.07％、6.10％和42.79％，CSF总体带毒率为19.15
RAPD技术是1990年创立的一种新的DNA遗传标记技术，能够用来检测基因组DNA的多态性，以及进行种株的鉴定和分类。本实验通过RAPD技术研究了猪肺炎支原体和猪鼻支原体基因组DNA遗传结构的差异，建立了鉴定这2个菌株的RAPD方法。
根据GeneBank中登录的猪肺炎支原体PB6(L-乳酸脱氢酶)全基因序列，设计合成了2对引物，建立了适合猪肺炎支原体检测的套式PCR方法。运用该方法对猪肺炎支原体(168株)培养物进行了检测。结果显示，该培养物能扩增出427bp的目的条带。特异性试验结果表明：鸡毒支原体、猪絮状支原体、猪鼻支原体、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌2型和猪流感病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、猪繁
根据毕赤酵母表达系统对于密码子的偏嗜性，将去除信号肽的猪干扰素α(PoIFN-α)基因重新设计改造和重新合成一段新的核苷酸序列，置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后，构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体，电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中，经ZeocinTM抗性筛选后获得大量多拷贝插入的重组子，SDS-PAGE和Western blot分析结果表明，所获得的重组子能够分泌
RT-PCR扩增技术，从经ConA活化的猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA中扩增出IFN-γ cDNA，将其克隆到pMD18-T载体中进行测序验证后，与原核表达载体pET30a(+)重组，构建含IFN-γ基因的重组表达质粒pET30a(+)/IFN-γ，测序结果与NCBI中已登录的IFN-γ基因序列比对，核苷酸序列同源性在98.6％～100％之间，氨基酸同源性在96.4％-99.4％;诱导表达含Hi
流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus，CAB)是引起集约化猪场繁殖障碍疾病的主要病原，研制安全、高效的疫苗是预防和控制本病的重要措施。本研究在构建CABmomp基因疫苗的基础上，通过将中药提取成分枸杞多糖与基因疫苗同时对小鼠进行免疫，评价了枸杞多糖对基因免疫的佐剂效应。结果表明，枸杞多糖可显着增强体液免疫效应，但未观察到更高的细胞免疫效应。本研究为进一步开展猪流产嗜性衣原体病
流感病毒核蛋白在流感病毒生命周期中起着重要作用，主要是包裹病毒核酸基因组，为病毒RNA的转录，复制及装配提供必要条件。本研究利用原核表达系统表达A型流感病毒H1N1亚型核蛋白，获得重组蛋白，为流感病毒相关研究打下基础。
本试验对1998-2008年覆盖我国东北、华北、华东、华南、西南及华中等地区的47株H9N2亚型禽流感分离株进行了HA蛋白全基因序列扩增及测序。研究发现：在中国大陆流行的H9N2亚型禽流感既有欧亚分支的毒株也有美洲分支的毒株，而且我国大陆地区流行的欧亚分支毒株只集中在A/Duck/HongKong/Y280/97(H9N2)亚分支中。中国大陆地区欧亚分支株的分离株亲源关系在86.8％-99.9％之
本试验从全国各地分离到的，已知HA基因序列的47株H9N2亚型禽流感病毒中，根据其HA蛋白氨基酸序列的差异，挑选出有代表性的12个毒株，比较这些HA蛋白的氨基酸序列的差异。用SPF鸡制备出这些毒株的免疫血清，通过交叉HI试验，计算出不同毒株间的抗原相关系数。通过对HA蛋白氨基酸序列的分析及抗原相关性的分析，我们发现这些毒株在抗原位点处，在第183位和188位氨基酸有所差异。通过对HA蛋白氨基酸序列