目的:为研究牦牛(Bos grunniens)热休克蛋白70-9B(heat shock 70 000protein-9B,HSPA9B)、热休克蛋白70-12B(heat shock 70 k D protein-12B,HSPA12B)和肿瘤抑制蛋白(tumor protein p53,Tp53)在牦牛早期体外受精胚胎中的表达差异及其与体外受精胚胎发育的关系。材料与方法:在正常生理条件下,采集青海高原牦牛卵巢,捡取A级和B级卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)进行体外受精和体外培养,采用实时荧光定量(RT-qPCR)和间接免疫荧光技术,检测HSPA9B、HSPA12B和Tp53在不同时期体外受精胚胎中的表达差异及其蛋白分布。结果:RT-qPCR结果表明:HSPA9B、HSPA12B和Tp53在牦牛体外受精2-4细胞期胚胎、5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中均有表达。其中HSPA9B在4~8细胞期胚胎中的相对表达量较高;HSPA12B在2-4细胞期胚胎中的相对表达量相对较高;Tp53在2~4细胞期和囊胚期表达量相对较低,Tp53在5~8细胞期和9~16期表达量相对较高。间接免疫荧光染色结果表明:在2~4细胞期胚胎、4~8细胞期胚胎和桑椹胚中,胞核HSPA9B的相对表达量较胞质弱,在囊胚中胞核HSPA9B的相对表达量较胞质强;Tp53蛋白主要存在于细胞核中,少量存在于细胞质中,其作用和DNA的损伤有关。结论:由此得出结论:HSPA9B可能在胚胎早期发育中发挥重要作用,通过蛋白水平研究发现HSPA9B在2~4细胞期胚胎、4~8细胞期胚胎和桑椹胚中,胞核HSPA9B的表达量较胞质的表达弱,在囊胚中胞核HSPA9B的表达量较胞质的表达强;在体外培养条件下,牦牛体外受精胚胎发育至囊胚时,HSPA9B蛋白的分布可能发生了移位。HSPA12B在牦牛体外受精胚胎的发育过程中非常重要,可能起着抑制细胞凋亡,延缓细胞衰老,调控胚胎早期发育的作用。Tp53在调节牦牛早期胚胎发育中也起着非常重要的作用,Tp53的表达量与胚胎发育阻断的发生几率成正相关。HSPA9B、HSPA12B和Tp53在参与牦牛体外早期受精胚胎发育和凋亡过程中起重要作用。