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本实验研究是通过制备AFB1人工免疫原和包被原,将制备的AFB1-BSA免疫原免疫Balb/c小鼠,得到特异性明显的多克隆克抗体;然后通过细胞融合技术,将免疫Balb/c小鼠脾细胞与NS0细胞融合,获得杂交瘤。用竞争ELISA和间接阻断ELISA法,筛选出三株抗AFB1的单克隆细胞株,选定一株进行小鼠体内诱生法制腹水,然后进行免疫学特性鉴定,其结果特异性好、敏感性强、IC50低,最终研制出检测AFB1的免疫学检测试剂。本实验研究的主要内容及结果如下:1、黄曲霉毒素B1人工抗原的制备与鉴定采用N-羟琥珀酰亚胺酯（N-hydroxysuccinimide NHS）法和碳二亚氨法（EDC）将AFB1分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原AFB1-BSA和包被抗原AFB1-OVA。采用紫外分光光度法（UV）和凝胶电泳（SDS-PAGE）进行鉴定,通过动物免疫试验获得鼠源多抗血清,并使用间接ELISA和阻断ELISA对多抗血清进行了鉴定。结果表明半抗原AFB1分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;免疫的6只小鼠效价均达1×10-4以上,3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50（50% inhibitive concentration,IC50）为48.6ng/mL。检测其特异性,只与黄曲霉毒素B2的交叉反应率为2.7%,与其它化同族化学相似物基本无交叉反应。通过实验鉴定,得到了效价高、敏感性强、特异性明显的多克隆抗体。2、抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及免疫学定量方法建立用人工抗原AFB1-BSA免疫BALB/C小鼠,通过间接ELISA和阻断ELISA的方法选择细胞融合备用鼠;用杂交瘤技术制备黄曲霉毒素B1单克隆抗体（AFB1mAb）,并对其效价、亲和力、敏感性、特异性、亚型进行鉴定;体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体。UV图谱和SDS-PAGE图表明半抗原AFB1分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;筛选出2H5-F6、2H5-C9、2H9-C3三株敏感性高、特异性强的杂交瘤细胞;鉴定单抗亚型均为IgG1;细胞培养上清间接ELISA效价在1:2.0×102～1:1.28×103之间,2H5-F6细胞株制作的腹水效价为1:1.28×105,AFB1mAb亲和常数Ka为2.65×1010L/moL,对AFB1的IC50为0.58ng/mL;与黄曲霉毒素B2的交叉反应率为3.22%,与其它类药物无交叉反应。通过试验获得高效价、敏感、特异的AFB1mAb,可用于各种食品中AFB1残留检测的免疫学试验。3、黄曲霉毒素B1免疫学快速检测方法的建立分别依据酶联免疫吸附和胶体金免疫层析试验原理,研制出的AFB1残留快速检测试剂。AFB1-Kit的标准曲线呈S型,符合检测的线性要求,半数抑制浓度IC50为0.58 ng/mL,样品试验中的批间和批内变异都小于<15%。对花生、玉米的添加0.1、1、10、100ng/mL AFB1标准品,平均回收率分别为92.5%和95.3%。AFB1-Kit性能稳定,检测样品快速、特异、便捷、时间短等优势,可以推广到生产中黄曲霉毒素B1残留的定性、定量检测中。