【摘 要】
：
目的：克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoproteiIl B mRNA editing cnzymc,catalyticpolypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法：分离健康五指山猪外周血单个核细胞,TRIZO法提取细胞总RNA,RT-PCR技术特异性扩增目的基因,目的基因插入真核表达载体pDSredl-N1及改
【机 构】
：
军事医学科学院野战输血研究所 解放军第305医院检验科 军事医学科学院野战输血研究所
【出 处】
：
2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会
论文部分内容阅读
目的：克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoproteiIl B mRNA editing cnzymc,catalyticpolypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法：分离健康五指山猪外周血单个核细胞,TRIZO法提取细胞总RNA,RT-PCR技术特异性扩增目的基因,目的基因插入真核表达载体pDSredl-N1及改造的pCDNA3-Flage载体构建表达质粒并在PK-15细胞中进行表达,通过激光共聚焦纤维镜及Western blot方法对目的基因的表达进行鉴定。结果：克隆的目的基因与公布的基因序列同源性达99%；激光共聚焦显微镜显示目的基因在PK-15细胞中实现了表达,且表达产物定位于细胞浆内：westem blot鉴定结果表明,表达的目的蛋白大小与预期相符。结论：成功构建了猪APOBEC3F真核表达载体,为研究猪APOBEC3F分子抗猪内源性反转录病毒机制及单克隆抗体的制备提供了实验基础。
其他文献
Neurodegeneration is a hallmark of many neurological diseases, including Alzheimers, Parkinsons and the polyglutamine diseases, which are all caused by misfolded proteins that accumulate in neuronal c
Multiple genetic modifications in pigs can essentially benefit research on agriculture, human disease and xenotransplantation. Most multi-transgenic pigs have been produced by complex and time-consumi
目的：西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指的合成与鉴定。方法：采用overlap PCR法拼接合成西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指两对tyrZl31-DD/RR及tyrZ131-KK/EL,将锌指转染GFP突变的转基因293T细胞,进行锌指有效性验证。转染后细胞在荧光显微镜下观察是否出现绿色荧光,同时应用流式分析修复效率。结果：合成两对锌指,测序证实锌指序列正确。将两对锌指转染293T细胞模型72h后
A pig model of wound healing was developed by excision of 2 cm diameter full thickness skin in young Yorkshire pigs. Theconsistency of this animal model for the molecular analysis of wound healing was
目的：确定成体西藏小型猪胰岛体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛。方法：对比不同质量浓度(1g/1,2g/1,3g/1,4g/1)和同一质量浓度条件下不同时间点(0min,l5min,30min,45min,60min,75min,90min)胶原酶分离获得胰岛的数量和效果。使用Ficoll400密度梯度离心、淋巴分离液分离、离心、静置4种方法纯化分离胰岛悬液,比较最终收
目的：西藏小型猪骨髓间充质干细胞的分离培养和纯化技术探讨。方法：对西藏小型猪分别进行骨髓获取、骨髓间充质干细胞分离、接种、培养以及传代。并测定骨髓间充质干细胞的生长活力。结果：利用密度梯度离心分离的原代细胞呈圆形且透明，接种后约fi小时开始贴壁，48-72小时开始变形，多数呈长梭形及多角形，且出现散在的集落样生长细胞，3-7d细胞数量迅速增多，部分呈漩涡状生长口第3代后细胞变得较为均质，到第10代
We conducted a large-scale survey on the existence and expression status of porcine endogenous retrovirus (PERV)in seven breeds of Chinese miniature pigs. Genotyping of PERV was examined by PCR using
目的：初步探讨建立西藏小型猪术前组织配型及肾移植模型可行性,为西藏小型猪进一步基础研究提供保障。方法：我们选择26头12—18月体重约25.30Kg的西藏小型猪来模拟人体器官移植的方法,选择其中ABO血型相同,交叉配血反应阴性,微量淋巴毒交叉实验(CDC)阴性(死亡细胞小于10%),单向混合淋巴细胞培养(MLR)反应性较低(受体淋巴细胞增值率0.450以下)的西藏小型猪,共12头。采用“CTX+P
Porcine endogenous retrovirus (PERV) in the pig genome represents a potential infectious risk in xenotransplantation. Chinese miniature pigs have been considered to be potential organ donors in China.
Existence of porcine endogenous retrovirus (DERV) hinders pigs to be used in clinical xenotransplantation toalleviate the shortage of human transplants. Chinese miniature pigs are potential organ don