【摘 要】
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谷氧还蛋白(Glutaredoxins,Grxs),又叫巯基转移酶(thioltransferase,TTase),在植物和哺乳动物中能够维持细胞内的氧化还原平衡和保护细胞免受氧化胁迫的损伤.本文假设棉铃虫Grxs在抗氧化防御的过程中起着重要的作用.利用RT-PCR的方法克隆得到了3个棉铃虫Grxs基因的全长cDNA序列,并分别命名为HaGrx、HaGrx3和HaGrx5.序列分析结果表明HaGr
【机 构】
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中国农业大学昆虫系,北京,100193
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谷氧还蛋白(Glutaredoxins,Grxs),又叫巯基转移酶(thioltransferase,TTase),在植物和哺乳动物中能够维持细胞内的氧化还原平衡和保护细胞免受氧化胁迫的损伤.本文假设棉铃虫Grxs在抗氧化防御的过程中起着重要的作用.利用RT-PCR的方法克隆得到了3个棉铃虫Grxs基因的全长cDNA序列,并分别命名为HaGrx、HaGrx3和HaGrx5.序列分析结果表明HaGrx有一个保守的CPYC位点,和其它选择的昆虫同源蛋白的氨基酸序列一致性较高,大概为58-78％.而HaGrx3和HaGrx5也都具有一个保守的CGF(S/G)催化活性位点.qRT-PCR结果显示HaGrx、HaGrx3和HaGrx5在不同发育阶段和不同组织里的表达均属于时间依赖型和空间依赖型.同时,HaGrx、HaGrx3和HaGrx5的mRNA表达也受到不同温度处理和双氧水处理的诱导.利用RNAi的方法将棉铃虫幼虫体内的HaGrx、HaGrx3和HaGrx5基因分别干涉掉,发现选择的大部分抗氧化基因的表达是上调的,只有Tpx基因是下调的.本文还进一步检测了RNAi介导的HaGrx、HaGrx3和HaGrx5基因的干涉对抗氧化酶活性和代谢成分的影响.结果 表明当这三个基因分别被干涉掉以后,SOD、CAT和POD的酶活性,过氧化氢、抗坏血酸、蛋白羰基和总谷胱甘肽的代谢活性均是升高的.这些结果强有力的证明了本文的假设,即棉铃虫HaGrx、HaGrx3和HaGrx5基因在抗氧化防御的过程中起着重要的作用,为进一步深入研究昆虫谷氧还蛋白家族基因的生理功能提供理论基础.
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