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目的 了解鼻咽癌干细胞的生物学行为特征、Ras 信号通路蛋白表达特征及CD44 与Ras 信号通路之间的调控关系,为寻找药物作用靶点提供依据.方法 采用无血清悬浮培养法获得鼻咽癌干细胞CNE2-SC、5-8F-SC,再采用Western blot 分析CD44、ABCG2、ALDH1 表达水平对干细胞进行鉴定；采用CCK-8 法和细胞计数仪计数法检测鼻咽癌细胞、鼻咽癌干细胞生长增殖情况；细胞平板克隆形成试验检测鼻咽癌细胞、鼻咽癌干细胞克隆形成能力；Transwell 体外试验检测鼻咽癌细胞、鼻咽癌干细胞迁移能力；采用siRNA 技术干扰鼻咽癌干细胞中CD44 的表达；Western Blot 法检测CD44,Ras 信号通路关键蛋白(Ras、p-MEK、p-ERK、N-Cadherin、PTEN、E-cadherin、p-AKT、p-PKCδ、Her2/ErbB2),细胞周期相关蛋白(P53、P21、CylinD1、CylinD3、CDK2、CDK4 和CDK6)的表达情况.结果 1.鼻咽癌干细胞生物学行为特征：采用无血清培养液悬浮培养获得的CNE2-SC、5-8F-SC 干细胞表面标记物CD44、ABCG2、ALDH1 的表达水平显著高于其来源细胞CNE2、5-8F；与鼻咽癌细胞CNE2、5-8F 比较,CNE2-SC、5-8F-SC 增殖慢,但克隆形成能力、迁移能力、粘附能力、成瘤能力强.2.鼻咽癌干细胞Ras 信号通路表达特征及CD44 对Ras 信号通路的调控作用：与CNE2、5-8F 细胞比较,CNE2-SC、5-8F-SC 细胞中CD44、Ras、p-MEK、p-ERK、N-Cadherin 表达水平显著增高,而PTEN、E-cadherin 表达水平显著降低.由此可见,Ras 信号通路在鼻咽癌干细胞中异常激活.CNE2-SC 中CD44 与Ras 蛋白表达水平相关系数r=0.985(P=0.002)；5-8F-SC 中CD44 与Ras 蛋白表达水平的r=0.962(P=0.038),CD44 与Ras 蛋白表达呈高度正相关.siRNA 技术干扰CD44 表达后,CD44 表达水平显著降低,同时Ras、p-AKT、p-ERK、p-PKCδ、Her2/ErbB2 表达水平显著降低.由此可见,鼻咽癌干细胞中CD44 可以调控Ras 信号通路的表达.与鼻咽癌普通细胞比较,鼻咽癌干细胞的细胞周期相关蛋白P53、P21、CylinD1、CylinD3、CDK2、CDK4 和CDK6 表达水平显著降低.结论 与其来源的鼻咽癌细胞比较,鼻咽癌干细胞生长增殖慢,但其克隆形成率高,迁移能力、粘附能力、成瘤能力强,这些特性可能与其CD44 调控的Ras 信号通路异常激活有关.