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目的:在细胞和分子水平探究小檗碱和阿霉素协同诱导乳腺癌细胞凋亡的作用机制。方法:用流式细胞术和Western Blot法分别考察小檗碱和阿霉素单用、合用,及在抗氧化剂NAC后干预后,对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-23 1的ROS产生、细胞凋亡、线粒体膜电位以及凋亡相关蛋白的影响;利用Agilent人类lncRNA+mRNA表达谱芯片v2.0考察小檗碱和阿霉素对乳腺癌细胞MDA-MB-231基因表达谱的影响,并在进行生物信息学分析的基础上,通过考察关键基因DUSP5的功能,进一步阐明小檗碱和阿霉素协同抗乳腺癌的作用机制。结果:小檗碱和阿霉素能够诱导ROS产生增加,降低线粒体膜电位,并诱导乳腺癌细胞凋亡,这些作用可被抗氧化剂NAC抑制,NAC也可抑制两药的协同抗乳腺癌作用。小檗碱和阿霉素合用后诱导激活型caspase-3的表达,促凋亡蛋白bax、bad表达增加,突变型p-p53表达下降,且该作用可被NAC抑制;在不同乳腺癌细胞株中,小檗碱和阿霉素作用后蛋白表达变化有一定的差异,MDA-MB-231细胞在药物作用后,p-p53(突变型)、p-erk、p-mek表达下降;在MCF-7细胞中,药物作用后p-p53(野生型)表达增加,而p-erk和p-mek并未见激活。基因表达谱、生物信息学分析及进一步的功能验证结果显示,MAPK可能是两药协同作用的关键通路,小檗碱和阿霉素可能通过激活DUSP5而抑制p-erk激活,从而发挥协同抗乳腺癌的作用。结论:本课题研究结果表明,小檗碱和阿霉素可以协同诱导乳腺癌细胞凋亡,其抗乳腺癌的机制是通过凋亡相关通路及MAPK通路协同发挥作用的。凋亡相关机制:1.激活线粒体凋亡通路;2.诱导ROS产生从而进一步激活线粒体凋亡通路;3.抑制突变型p53的活性。MAPK通路相关机制:1.抑制MEK/ERK/CREB通路;2.上调DUSP5表达,从而抑制p-erk的激活;3.抑制p-JNK、p-p38的激活。