【摘 要】
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本研究利用自行筛选、鉴定的黑曲霉F246,根据植酸酶基因(phyA)成熟肽编码序列设计合成引物,直接PCR扩增phyA,经酶切分析和DNA测序、氨基酸序列分析证实phyA基因克隆成功。从pMD18T-phyA克隆中获得phyA编码序列,将其与pET30a+质粒连接,构建pET30a+-phyA重组表达质粒,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组质粒经IPTG诱导表达,SDS-PAGE特异区带分子量为5
【机 构】
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重庆市畜牧科学研究院重庆市养猪科学重点实验室 402460 重庆大学生物工程学院国家教育部生物力学与组织工程重点实验室 重庆 400044
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本研究利用自行筛选、鉴定的黑曲霉F246,根据植酸酶基因(phyA)成熟肽编码序列设计合成引物,直接PCR扩增phyA,经酶切分析和DNA测序、氨基酸序列分析证实phyA基因克隆成功。从pMD18T-phyA克隆中获得phyA编码序列,将其与pET30a+质粒连接,构建pET30a+-phyA重组表达质粒,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组质粒经IPTG诱导表达,SDS-PAGE特异区带分子量为50kDa,此重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的40％左右,酶活性较天然植酸酶高8倍以上。因此,该phyA基因具有正常的生物学功能,对其进行深入研究,为大量获得高活性植酸酶以及开发新型微生态制剂奠定了基础。
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