【摘 要】
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本研究根据GenBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K酵母表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5端不含信号肽序列,3端添加了终止密码子的IBVS1基因表达片段.用限制性内切酶SnaBⅠ和NotⅠ将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1.用限制性内切酶BglⅡ将表达质粒pPIC9K-
【机 构】
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四川农业大学动物科技学院动物预防医学与生物工程实验室
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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本研究根据GenBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K酵母表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5端不含信号肽序列,3端添加了终止密码子的IBVS1基因表达片段.用限制性内切酶SnaBⅠ和NotⅠ将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1.用限制性内切酶BglⅡ将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1His+Muts.将重组菌株在1﹪的甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot分析,结果表明,IBVS1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76KD,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5﹪.本研究表达的IBVS1蛋白可作为制备IB诊断抗原、基因工程疫苗的基础材料,对IB的诊断防治有重要的学术价值和应用价值.
其他文献
目的：分析减毒沙门氏菌运送CD8+T细胞表位诱导机体产生特异性细胞免疫应答.方法：通过构建融合表达OVA257-264aa和LCMVNPNP118-132aaCD8+T细胞表位的原核表达质粒ptG2F,以电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,筛选重组菌SL7207(ptG2F).采用静脉注射免疫C57BL/6和BALB/c小鼠,间隔2周,分别于第2次和第3次免疫后取免疫小鼠脾细胞,用ELIS
根据GenBank中大肠杆菌O157(rfbo157基因)、Vero毒素1(vt1)及Vero毒素2(vt2),肠溶血素(hlyA)和紧密素(eaeA)基因的特异性序列,设计合成5对寡核苷酸引物,建立了一个快速鉴定大肠杆菌O157的多重PCR方法.经过条件的优化及特异性,重复性的检测后,对62株临床分离菌株进行检测,结果有8株鉴定为大肠杆菌O157,其扩增产物与预期完全一致,而其他菌株的DNA中未
无乳链球菌(Streptococcus.agalactiae)引起的奶牛乳房炎主要表现为隐性型,往往需要通过实验室检查才能确诊.本研究建立了一种特异、敏感和快速的套式PCR方法用于检测奶样中的无乳链球菌.利用链球菌属(Streptococcus)16SrRNA基因的保守区设计通用引物作为链球菌属的阳性控制,在保守区内的可变区设计无乳链球菌特异的引物.研究结果表明,通过奶样中无乳链球菌的增菌培养,简
西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)于1937年在非洲的乌干达首次被发现,从West Nile地区的1名发热的成年妇女血液中分离到,因此得名West Nile virus.西尼罗病毒属于黄病毒科黄病毒属成员.黄病毒科病毒共由70余种成员组成,同属这一科的还有登革热病病毒、日本脑炎病毒以及黄热病病毒等,它们大多属于经蚊虫、蜱等媒介传播的虫媒病毒.西尼罗病毒广泛分布于非洲、中东和西亚,
变形链球菌(S.mutans)C型是引起龋齿的主要致病菌,其表面蛋白PAc是致龋变链菌重要的毒力因子之一,在细菌对牙齿的初始黏附中起重要作用,具有良好的免疫原性,可诱导机体的保护性免疫应答.本研究用纯化的变形链球菌重组表面蛋白AP包被免疫试管对pDAN5噬菌体抗体库进行5轮亲和免疫筛选,第5轮筛选后洗脱下来的噬菌体与第一轮相比,富集了30倍.筛选得到13株噬菌体单链抗体,经ELISA检测OD450
仔鹿毛球病是由于异食癖等原因,吞吃被毛,在胃肠道中形成毛球,引起消化道的综合病症.若不及时采取有效措施将会给马鹿养殖业造成较大的损失.我区马鹿养殖规模较大,每年所产仔鹿也较多.据调查,某鹿场1999年有仔鹿182头,8月中旬断奶,9月初陆续发生本病,前后共发病17头仔鹿(占仔鹿的9.3﹪),发病仔鹿先后死亡5头,造成不小的经济损失.仔鹿毛球病多发生在断奶后.断奶前,母鹿由于营养缺乏或其他原因发生掉
尼帕病毒和亨得拉病毒是近年来发现的两种新的副粘病毒,能引起多种动物感染,是重要的人兽共患病病毒,人感染后主要表现为呼吸道和神经系统症状,并有较高的致死率.为防范两种病毒在我国的爆发和流行,本试验利用昆虫杆状病毒表达系统对两种病毒的核蛋白基因(N)进行了表达,利用SDS-PAGE电泳分析了两种重组蛋白表达的时效关系,同时应用Western-blot和间接免疫荧光(IFA)对两种重组蛋白和兔抗NiV和
本研究以IBVpcDNA质粒和卵磷脂等为材料对pcDNA/脂质体的制备工艺进行了初步研究.结果表明:逆向蒸发法制备的脂质体的形态结构较脂膜法制备均匀,通过0.45μm微孔滤膜过滤后可得到粒径为80～400nm的复合物;pcDNA/脂质体复合物经冷冻干燥后,用超速离心电泳分析表明,其包封效果比冻干前好,冻干保护剂以海藻糖的效果最好.本实验为进一步研制IBV的DNA疫苗打下了基础.
本研究建立了检测雏鹅感染鹅细小病毒的间接免疫酶组织化学法(IndirectImmunoperoxidaseStaining,ⅡS),该法与GPV感染死亡雏鹅的肝组织呈强阳性,而与鹅源血清1型鸭疫里默氏菌、大肠菌(O1,O8)、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌(5:A)、雏鹅新型病毒性肠炎感染死亡和正常雏鹅肝呈阴性反应.利用建立的免疫组化法检测1日龄雏鹅人工感染GPV后死亡雏鹅的不同器官,结果肝、脾、肾、胸
收获感染鸡胚的胚液及胎儿,并测定其病毒含量,30-36小时死胚胎儿的EID50为105.3-105..67/0.1ml,感染36小时的活胚胎儿EID50为106..5/0.1ml,将感染30-36小时的死胚和活胚作为两苗的半成品,可以把鸡胚的利用率提高3倍以上。